דאנק איר פֿאַר באזוכן Nature.com.דער בלעטערער ווערסיע איר נוצן האט לימיטעד CSS שטיצן.פֿאַר דער בעסטער דערפאַרונג, מיר רעקאָמענדירן אַז איר נוצן אַ דערהייַנטיקט בלעטערער (אָדער דיסייבאַל קאַמפּאַטאַבילאַטי מאָדע אין Internet Explorer).אין דער דערווייל, צו ענשור פארבליבן שטיצן, מיר וועלן מאַכן דעם פּלאַץ אָן סטיילז און דזשאַוואַסקריפּט.
טאָקסאָפּלאַסמאַ גאָנדיי איז אַן ינטראַסעללולאַר פּראָטאָזאָאַן פּעראַסייט וואָס מאַדזשאַלייץ די מיקראָענוויראָנמענט פון די ינפעקטאַד באַלעבאָס און איז באַוווסט צו זיין פארבונדן מיט די ינסידאַנס פון מאַרך אָנוווקס גראָוט.אין דעם לערנען, מיר כייפּאַטייזיז אַז עקסאָסאָומאַל מירנאַ-21 פֿון טאָקסאָפּלאַסמאַ ינפעקציע פּראַמאָוץ מאַרך אָנוווקס גראָוט.עקסאָסאָמעס פון טאָקסאָפּלאַסמאַ-ינפעקטאַד BV2 מיקראָגליאַ זענען קעראַקטערייזד און ינטערנאַליזיישאַן פון U87 גליאָמאַ סעלז איז באשטעטיקט.עקסאָסאָמאַל מיקראָרנאַ אויסדרוק פּראָופיילז זענען אַנאַלייזד מיט מיקראָרנאַ און מיקראָרנאַ-21A-5p ערייז פֿאַרבונדן מיט טאָקסאָפּלאַסמאַ גאָנדיי און אָנוווקס סאָרטינג.מיר אויך ינוועסטאַגייטאַד די מרנאַ לעוועלס פון אָנוווקס-פֿאַרבונדן גענעס אין U87 גליאָמאַ סעלז דורך אָלטערינג מיר-21 לעוועלס אין עקסאָסאָמע און די ווירקונג פון עקסאָסאָמע אויף מענטשלעך U87 גליאָמאַ צעל פּראָוליפעריישאַן.אין עקסאָסאָמע פון ​​U87 גליאָמאַ סעלז ינפעקטאַד מיט טאָקסאָפּלאַסמאַ גאָנדיי, דער אויסדרוק פון מיקראָרנאַ-21 איז געוואקסן און די טעטיקייט פון אַנטיטומאָר גענעס (FoxO1, PTEN און PDCD4) איז רידוסט.BV2-דערייווד עקסאָסאָמע ינפעקטאַד מיט טאָקסאָפּלאַסמאַ ינדוסירן פּראָוליפעריישאַן פון U87 גליאָמאַ סעלז.עקסאָסאָמעס ינדוסירן וווּקס פון U87 סעלז אין אַ מויז אָנוווקס מאָדעל.מיר פֿאָרשלאָגן אַז געוואקסן עקסאָסאָומאַל מיר-21 אין טאָקסאָפּלאַסמאַ-ינפעקטאַד BV2 מיקראָגליאַ קען שפּילן אַ וויכטיק ראָלע ווי אַ צעל גראָוט פּראָמאָטער אין U87 גליאָמאַ סעלז דורך דאַונרעגיאַלייטינג אַנטיטומאָר גענעס.
עס איז עסטימאַטעד אַז מער ווי 18.1 מיליאָן קאַסעס פון אַוואַנסירטע ראַק זענען דיאַגנאָסעד ווערלדווייד אין 2018, מיט וועגן 297,000 טומאָרס פון די הויפט נערוועז סיסטעם דיאַגנאָסעד יעדער יאָר (1.6% פון אַלע טומאָרס)1.פרייַערדיק פאָרשונג האט געוויזן אַז ריזיקירן סיבות פֿאַר דעוועלאָפּינג מענטש מאַרך טומאָרס אַרייַננעמען פאַרשידן כעמישער פּראָדוקטן, משפּחה געשיכטע, און ייאַנייזינג ראַדיאַציע פון ​​קאָפּ טעראַפּיוטיק און דיאַגנאָסטיק ויסריכט.אָבער, די פּינטלעך סיבה פון די מאַליגנאַנסיז איז אומבאַקאַנט.בעערעך 20% פון אַלע קאַנסערץ ווערלדווייד זענען געפֿירט דורך ינפעקטיאָוס אגענטן, אַרייַנגערעכנט ווירוסעס, באַקטיריאַ און פּעראַסייץ3,4.ינפעקטיאָוס פּאַטאַדזשאַנז צעשטערן די גענעטיק מעקאַניזאַמז פון דער באַלעבאָס צעל, אַזאַ ווי דנאַ פאַרריכטן און די צעל ציקל, און קענען פירן צו כראָניש אָנצינדונג און שעדיקן צו די ימיון סיסטעם5.
ינפעקטיאָוס אגענטן פֿאַרבונדן מיט מענטש ראַק זענען די מערסט פּראָסט וויראַל פּאַטאַדזשאַנז, אַרייַנגערעכנט מענטש פּאַפּיללאָמאַווירוס און העפּאַטיטיס ב און C ווירוסעס.פּעראַסייץ קענען אויך שפּילן אַ פּאָטענציעל ראָלע אין דער אַנטוויקלונג פון מענטש ראַק.עטלעכע פּעראַסייט מינים, ניימלי Schistosoma, Opishorchis viverrini, O. felineus, Clonorchis sinensis און Hymenolepis nana, האָבן שוין ימפּלאַקייטיד אין פאַרשידן טייפּס פון מענטש ראַק 6,7,8.
טאָקסאָפּלאַסמאַ גאָנדיי איז אַ ינטראַסעללולאַר פּראָטאָזאָאַן וואָס רעגיאַלייץ די מיקראָענוויראָנמענט פון ינפעקטאַד באַלעבאָס סעלז.דער פּעראַסייט איז עסטימאַטעד צו אָנשטעקן בעערעך 30% פון די וועלט 'ס באַפעלקערונג, שטעלן די גאנצע באַפעלקערונג אין ריזיקירן 9,10.טאָקסאָפּלאַסמאַ גאָנדיי קענען אָנשטעקן וויטאַל אָרגאַנס, אַרייַנגערעכנט די הויפט נערוועז סיסטעם (CNS), און גרונט ערנסט ילנאַסיז אַזאַ ווי פאַטאַל מענינגיטיס און ענסעפאַליטיס, ספּעציעל אין יממונאָקאָמפּראָמיסעד פּאַטיענץ9.אָבער, טאָקסאָפּלאַסמאַ גאָנדיי קענען אויך טוישן די סוויווע פון ​​​​די ינפעקטאַד באַלעבאָס דורך מאָדולאַטינג צעל גראָוט און ימיון רעספּאָנסעס אין ימיונאָקאָמפּעטענט מענטשן, לידינג צו די וישאַלט פון אַ אַסימפּטאָמאַטיק כראָניש ינפעקציע9,11.ינטערעסטינגלי, געגעבן די קאָראַליישאַן צווישן ט. גאָנדיי פּרעוואַלאַנס און מאַרך אָנוווקס ינסידאַנס, עטלעכע ריפּאָרץ פֿאָרשלאָגן אַז אין וויוואָו באַלעבאָס ינווייראַנמענאַל ענדערונגען רעכט צו כראָניש ט. גאָנדיי ינפעקציע ריזעמבאַל די אָנוווקס מיקראָענוויראָנמענט.
עקסאָסאָמעס זענען באקאנט ווי ינטערסעללולאַר קאַמיונאַקייטערז וואָס צושטעלן בייאַלאַדזשיקאַל אינהאַלט, אַרייַנגערעכנט פּראָטעינס און נוקלעיק אַסאַדז, פֿון ארומיקע סעלז 16,17.עקסאָסאָמעס קענען ווירקן אָנוווקס-פֿאַרבונדענע בייאַלאַדזשיקאַל פּראַסעסאַז אַזאַ ווי אַנטי-אַפּאָפּטאָסיס, אַנגיאָגענעסיס און מעטאַסטאַסיס אין די אָנוווקס מיקראָענוויראָנמענט.אין באַזונדער, מירנאַס (מירנאַס), קליין ניט-קאָדינג רנאַס וועגן 22 נוקלעאָטידעס אין לענג, זענען וויכטיק פּאָסט-טראַנסקריפּשאַנאַל דזשין רעגיאַלייטערז וואָס קאָנטראָלירן מער ווי 30% פון מענטש מרנאַ דורך די מירנאַ-ינדוסט סילענסינג קאָמפּלעקס (מיריסק).טאָקסאָפּלאַסמאַ גאָנדיי קענען צעשטערן בייאַלאַדזשיקאַל פּראַסעסאַז דורך קאַנטראָולינג מירנאַ אויסדרוק אין ינפעקטאַד מחנות.האָסט מירנאַס אַנטהאַלטן וויכטיק סיגנאַלז פֿאַר רעגיאַלייטינג באַלעבאָס בייאַלאַדזשיקאַל פּראַסעסאַז צו דערגרייכן די ניצל סטראַטעגיע פון ​​פּעראַסייט.אזוי, לערנען ענדערונגען אין דער באַלעבאָס מירנאַ פּראָפיל אויף ינפעקציע מיט T. gondii קענען העלפֿן אונדז פֿאַרשטיין די ינטעראַקשאַן צווישן די באַלעבאָס און T. gondii מער קלאר.טאקע, Thirugnanam et al.15 סאַגדזשעסטיד אַז טי גאָנדיי פּראַמאָוץ מאַרך קאַרסינאָגענעסיס דורך אָלטערינג זייַן אויסדרוק אויף ספּעציפיש באַלעבאָס מירנאַס פֿאַרבונדן מיט אָנוווקס גראָוט און געפונען אַז טי גאָנדיי קענען אָנמאַכן גליאָמאַ אין יקספּערמענאַל אַנימאַלס.
דער לערנען פאָוקיסיז אויף די אָלטערניישאַן פון עקסאָסאָמאַל מיר-21 אין באַלעבאָס מיקראָגליאַ ינפעקטאַד מיט טאָקסאָפּלאַסמאַ בוו2.מיר באמערקט אַ מעגלעך ראָלע פון ​​אָלטערד עקסאָסאָמאַל מיר-21 אין דעם וווּקס פון U87 גליאָמאַ סעלז רעכט צו דער ריטענשאַן אין די קערן פון FoxO1 / p27, וואָס איז דער ציל פון אָוווערעקספּרעססעד מיר-21.
עקסאָסאָמעס דערייווד פון BV2 זענען באקומען מיט דיפערענטשאַל סענטריפוגיישאַן און וואַלאַדייטאַד דורך פאַרשידן מעטהאָדס צו פאַרמייַדן קאַנטאַמאַניישאַן מיט סעליאַלער קאַמפּאָונאַנץ אָדער אנדערע וועסיקלעס.SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) געוויזן פאַרשידענע פּאַטערנז צווישן פּראָטעינס יקסטראַקטיד פון BV2 סעלז און עקסאָסאָומז (פיגורע 1A), און סאַמפּאַלז זענען אַססעססעד פֿאַר די בייַזייַן פון Alix, וואָס איז געווען אַנאַלייזד דורך מערב בלאָטינג פון עקססאָמאַל פּראָטעין מאַרקערס אין .אַליקס לייבלינג איז געפונען אין עקסאָסאָמע פּראָטעינס אָבער נישט אין בוו2 צעל ליסאַטע פּראָטעינס (פיגורע 1ב).אין אַדישאַן, פּיוראַפייד רנאַ פֿון עקסאָסאָמעס דערייווד פון BV2 איז אַנאַלייזד מיט אַ ביאָאַנאַליזער.18S און 28S ריבאָסאָמאַל סובוניץ זענען ראַרעלי באמערקט אין די עקסאָסאָומאַל רנאַ מייגריישאַן מוסטער, ינדאַקייטינג פאַרלאָזלעך ריינקייַט (פיגורע 1C).צום סוף, טראַנסמיסיע עלעקטראָן מיקראָסקאָפּי געוויזן אַז די באמערקט עקסאָסאָמעס זענען וועגן 60-150 נם אין גרייס און האט אַ גלעזל-ווי סטרוקטור טיפּיש פון עקסאָסאָמע מאָרפאָלאָגי (Fig. 1 ד).
קעראַקטעריסטיקס פון עקסאָסאָמע דערייווד פון BV2 סעלז.(א) זיכערקייַט דאַטן בלאַט בלאַט.פּראָטעינס זענען אפגעזונדערט פון BV2 סעלז אָדער עקסאָסאָמע דערייווד פון BV2.פּראָטעין פּאַטערנז זענען אַנדערש צווישן סעלז און עקסאָסאָומז.(ב) מערב בלאָט אַנאַליסיס פון אַן עקסאָסאָמאַל מאַרקער (Alix).(C) אפשאצונג פון פּיוראַפייד רנאַ פון BV2 סעלז און BV2 דערייווד עקסאָסאָמעס ניצן אַ ביאָאַנאַליזער.אזוי, 18S און 28S ריבאָסאָמאַל סובוניץ אין BV2 סעלז זענען ראַרעלי געפֿונען אין עקסאָסאָמאַל רנאַ.(ד) טראַנסמיסיע עלעקטראָן מיקראָסקאָפּי געוויזן אַז עקסאָסאָמעס אפגעזונדערט פון בוו 2 סעלז זענען נעגאַטיוולי סטיינד מיט 2% וראַניל אַסאַטייט.עקסאָסאָמעס זענען בעערעך 60-150 נם אין גרייס און גלעזל-שייפּט (ליד און יונג, אַנפּאַבלישט דאַטן).
סעליאַלער ינערלעךיזיישאַן פון BV2-דערייווד עקסאָסאָמע אין U87 מענטשלעך גליאָמאַ סעלז איז באמערקט מיט קאַנפאָקאַל מיקראָסקאָפּי.PKH26 מיטן נאָמען עקסאָסאָומז זענען לאָוקאַלייזד אין די סיטאָפּלאַסם פון U87 סעלז.נוקליי זענען סטיינד מיט DAPI (Fig. 2A), ינדאַקייטינג אַז BV2-דערייווד עקסאָסאָומז קענען זיין ינטערנאַלייזד דורך באַלעבאָס סעלז און השפּעה די סוויווע פון ​​באַקומער סעלז.
ינטערנאַליזאַטיאָן פון BV2-דערייווד עקסאָסאָמע אין U87 גליאָמאַ סעלז און BV2-דערייווד עקסאָסאָמע ינפעקטאַד מיט טאָקסאָפּלאַסמאַ רה ינדוסט פּראָוליפעריישאַן פון U87 גליאָמאַ סעלז.(א) עקסאָסאָמע ינגאַלפט דורך U87 סעלז געמאסטן דורך קאַנפאָקאַל מיקראָסקאָפּי.U87 גליאָמאַ סעלז זענען ינקובייטיד מיט עקסאָסאָמע מיט PKH26 (רויט) אָדער אָן קאָנטראָל פֿאַר 24 שעה.די נוקליי זענען סטיינד מיט DAPI (בלוי) און דערנאָך באמערקט אונטער אַ קאָנפאָקאַל מיקראָסקאָפּ (וואָג באַר: 10 μm, X 3000).(ב) U87 גליאָמאַ צעל פּראָוליפעריישאַן איז באשלאסן דורך צעל פּראָוליפעריישאַן אַסייַ.U87 גליאָמאַ סעלז זענען באהאנדלט מיט עקסאָסאָמע פֿאַר די אנגעוויזן צייט. * P <0.05 איז באקומען דורך תּלמיד ס ה פּראָבע. * P <0.05 איז באקומען דורך תּלמיד ס ה פּראָבע. * פּ < 0,05 פּראָצענט פון די סטאַנדאַרדס. * P <0.05 דורך תּלמיד ס ה-פּרובירן. *P <0.05 通过学生t 检验获得. *P <0.05 * P < 0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 באקומען מיט תּלמיד ס ה-פּרובירן.
נאָך באַשטעטיקן די ינטערנאַליזיישאַן פון BV2-דערייווד עקסאָסאָומז אין U87 גליאָמאַ סעלז, מיר דורכגעקאָכט צעל פּראָוליפעריישאַן אַסייסאַז צו פאָרשן די ראָלע פון ​​BV2-דערייווד טאָקסאָפּלאַסמאַ-דערייווד עקסאָסאָמע אין דער אַנטוויקלונג פון מענטשלעך גליאָמאַ סעלז.באַהאַנדלונג פון ו87 סעלז מיט עקסאָסאָמע פון ​​טי גאָנדיי-ינפעקטאַד בוו2 סעלז געוויזן אַז טי גאָנדיי-ינפעקטאַד בוו2-דערייווד עקסאָסאָמע געפֿירט באטייטיק העכער פּראָוליפעריישאַן פון ו87 סעלז קאַמפּערד צו קאָנטראָל (פיגורע 2ב).
אין אַדישאַן, די גראָוט פון U118 סעלז האט די זעלבע רעזולטאַטן ווי U87, ווייַל טאָקסאָפּלאַסמאַ סטימיאַלייטאַד עקסאָסאָמע געפֿירט די העכסטן לעוועלס פון פּראָוליפעריישאַן (דאַטן ניט געוויזן).באַזירט אויף די דאַטן, מיר קענען אָנווייַזן אַז BV2-דערייווד טאָקסאָפּלאַסמאַ-ינפעקטאַד עקסאָסאָמעס שפּילן אַ וויכטיק ראָלע אין גליאָמאַ צעל פּראָוליפעריישאַן.
צו פאָרשן די ווירקונג פון טאָקסאָפּלאַסמאַ-ינפעקטאַד BV2-דערייווד עקסאָסאָומז אויף אָנוווקס אַנטוויקלונג, מיר ינדזשעקטיד U87 גליאָמאַ סעלז אין נאַקעט מיסע פֿאַר אַ קסענאָגראַפט מאָדעל און ינדזשעקטיד BV2-דערייווד עקסאָסאָומז אָדער RH-ינפעקטאַד BV2-דערייווד עקסאָסאָומז.נאָך טומאָרס געווארן קלאָר נאָך 1 וואָך, יעדער יקספּערמענאַל גרופּע פון ​​​​5 מיסע איז צעטיילט לויט צו אָנוווקס גרייס צו באַשטימען די זעלבע סטאַרטינג פונט, און אָנוווקס גרייס איז געמאסטן פֿאַר 22 טעג.
אין מיסע מיט די U87 קסענאָגראַפט מאָדעל, באטייטיק גרעסערע אָנוווקס גרייס און וואָג זענען באמערקט אין די BV2-דערייווד RH-ינפעקטאַד עקסאָסאָמע גרופּע אין טאָג 22 (Fig. 3A, B).אויף די אנדערע האַנט, עס איז קיין באַטייטיק חילוק אין אָנוווקס גרייס צווישן די BV2-דערייווד עקסאָסאָמע גרופּע און די קאָנטראָל גרופּע נאָך עקסאָסאָמע באַהאַנדלונג.אין דערצו, מיסע ינדזשעקטיד מיט גליאָמאַ סעלז און עקסאָסאָומז וויזשוואַלי געוויזן די גרעסטן אָנוווקס באַנד אין דער גרופּע פון ​​RH-ינפעקטאַד בוו2-דערייווד עקסאָסאָמעס (Fig. 3C).די רעזולטאַטן באַווייַזן אַז BV2-דערייווד טאָקסאָפּלאַסמאַ-ינפעקטאַד עקסאָסאָמעס ינדוסירן גליאָמאַ גראָוט אין אַ מויז אָנוווקס מאָדעל.
אָנקאָגענעסיס (AC) פון BV2-דערייווד עקסאָסאָמעס אין אַ U87 קסענאָגראַפט מויז מאָדעל.אָנוווקס גרייס (א) און וואָג (ב) זענען באטייטיק געוואקסן אין BALB / C נאַקעט מיסע באהאנדלט מיט RH-ינפעקטאַד עקסאָסאָומז דערייווד פון BV2.BALB / C נאַקעט מיסע (C) זענען ינדזשעקטיד סובקוטאַנעאָוסלי מיט 1 X 107 ו87 סעלז סוספּענדעד אין מאַטריגעל געמיש.זעקס טעג נאָך ינדזשעקשאַן, 100 μג פון BV2-דערייווד עקסאָסאָמעס זענען באהאנדלט אין מיסע.אָנוווקס גרייס און וואָג זענען געמאסטן אויף די אנגעוויזן טעג און נאָך קרבן, ריספּעקטיוולי. *P <0.05. *P <0.05. *Р < 0,05. *P <0.05. *P <0.05. *P <0.05. *Р < 0,05. *P <0.05.
די דאַטן געוויזן אַז 37 מירנאַס (16 אָוווערעקספּרעססעד און 21 דאַונעקספּרעססעד) פֿאַרבונדן מיט ימיונאַטי אָדער אָנוווקס אַנטוויקלונג זענען באטייטיק אָלטערד אין מיקראָגליאַ נאָך ינפעקציע מיט די טאָקסאָפּלאַסמאַ רה שפּאַנונג (Fig. 4A).קאָרעוו אויסדרוק לעוועלס פון מיר-21 צווישן אָלטערד מירנאַס זענען באשטעטיקט דורך פאַקטיש-צייט RT-PCR אין עקסאָסאָמע דערייווד פון BV2, עקסאָסאָמע באהאנדלט מיט BV2 און U87 סעלז.די אויסדרוק פון מיר-21 געוויזן אַ באַטייטיק פאַרגרעסערן אין עקסאָסאָומז פון בוו2 סעלז ינפעקטאַד מיט טאָקסאָפּלאַסמאַ גאָנדיי (רה שפּאַנונג) (פיגורע 4 ב).קאָרעוו אויסדרוק לעוועלס פון מיר-21 אין BV2 און U87 סעלז געוואקסן נאָך אַפּטייק פון אָלטערד עקסאָסאָומז (Fig. 4B).די קאָרעוו לעוועלס פון מיר-21 אויסדרוק אין די מאַרך געוועבן פון אָנוווקס פּאַטיענץ און מיסע ינפעקטאַד מיט טאָקסאָפּלאַסמאַ גאָנדיי (מע49 שפּאַנונג) זענען העכער ווי אין קאָנטראָלס, ריספּעקטיוולי (Fig. 4C).די רעזולטאַטן קאָראַלייט מיט דיפעראַנסיז צווישן די אויסדרוק לעוועלס פון פּרעדיקטעד און באשטעטיקט מיקראָרנאַס אין וויטראָ און אין וויוואָו.
ענדערונגען אין דער אויסדרוק פון עקסאָסאָמאַל מיפּ-21אַ-5פּ אין מיקראָגליאַ ינפעקטאַד מיט טאָקסאָפּלאַסמאַ גאָנדיי (רה).(א) דעמאַנסטרייץ באַטייַטיק ענדערונגען אין סירנאַ פֿאַרבונדן מיט ימיונאַטי אָדער אָנוווקס אַנטוויקלונג נאָך T. gondii RH ינפעקציע.(ב) קאָרעוו מיר-21 אויסדרוק לעוועלס זענען דיטעקטאַד דורך פאַקטיש-צייט RT-PCR אין BV2-דערייווד עקסאָסאָומז, BV2-באהאנדלט עקסאָסאָומז און U87 סעלז.(C) קאָרעוו מיר-21 אויסדרוק לעוועלס זענען געפֿונען אין די מאַרך געוועבן פון אָנוווקס פּאַטיענץ (N = 3) און מיסע ינפעקטאַד מיט טאָקסאָפּלאַסמאַ גאָנדיי (ME49 שפּאַנונג) (N = 3). * P <0.05 איז באקומען דורך תּלמיד ס ה פּראָבע. * P <0.05 איז באקומען דורך תּלמיד ס ה פּראָבע. *P < 0,05 אַמפּ; * P <0.05 איז באקומען מיט תּלמיד ס ה-פּרובירן. *P <0.05 通过学生t 检验获得. *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 באקומען מיט תּלמיד ס ה-פּרובירן.
עקסאָסאָמעס פון RH-ינפעקטאַד בוו2 סעלז געפירט צו דער וווּקס פון גליאָמאַ אין וויוואָו און אין וויטראָ (Fig. 2, 3).צו דעטעקט באַטייַטיק מרנאַס, מיר יגזאַמאַנד מרנאַ לעוועלס פון אַנטיטומאָר ציל גענעס, פאָרקכעאַד קעסטל O1 (FoxO1), PTEN און פּראָוגראַמד צעל טויט 4 (PDCD4) אין U87 סעלז ינפעקטאַד מיט עקסאָסאָמע דערייווד פון BV2 אָדער RH BV2.ביאָינפאָרמאַטיקס אַנאַליסיס האט געוויזן אַז עטלעכע אָנוווקס-פֿאַרבונדן גענעס, אַרייַנגערעכנט די FoxO1, PTEN און PDCD4 גענעס, האָבן מיר-2121,22 ביינדינג זייטלעך.מרנאַ לעוועלס פון אַנטיטומאָר ציל גענעס זענען רידוסט אין רה-ינפעקטאַד בוו2-דערייווד עקסאָסאָמע קאַמפּערד צו BV2-דערייווד עקסאָסאָומז (Fig. 5A).FoxO1 געוויזן רידוסט פּראָטעין לעוועלס אין RH-ינפעקטאַד BV2-דערייווד עקסאָסאָמע קאַמפּערד מיט BV2-דערייווד עקסאָסאָמעס (פיגורע 5ב).באַזירט אויף די רעזולטאַטן, מיר קען באַשטעטיקן אַז עקסאָסאָמע דערייווד פון RH-ינפעקטאַד BV2 דאַונרעגולירן אַנטי-אָנקאָגעניק גענעס און האַלטן זייער ראָלע אין אָנוווקס וווּקס.
טאָקסאָפּלאַסמאַ רה-ינפעקטאַד בו 2-דערייווד עקסאָסאָמעס ינדוס סאַפּרעשאַן פון אַנטיטומאָר גענעס אין ו87 גליאָמאַ סעלז דורך טאָקסאָפּלאַסמאַ רה-ינפעקטאַד בו 2-דערייווד עקסאָסאָמעס.(א) פאַקטיש-צייט פּקר פון FoxO1, PTEN און PDCD4 אויסדרוק אין עקסאָסאָמעס דערייווד פון T. gondii RH-ינפעקטאַד BV2 קאַמפּערד מיט PBS עקסאָסאָמעס.β-אַקטין מרנאַ איז געניצט ווי אַ קאָנטראָל.(ב) FoxO1 אויסדרוק איז באשלאסן דורך מערב בלאָטינג און דענסיטאָמעטרי דאַטן זענען סטאַטיסטיש עוואַלואַטעד ניצן די ImageJ פּראָגראַם. * P <0.05 איז באקומען דורך תּלמיד ס ה פּראָבע. * P <0.05 איז באקומען דורך תּלמיד ס ה פּראָבע. *P < 0,05 אַמפּ; * P <0.05 איז באקומען מיט תּלמיד ס ה-פּרובירן. *P <0.05 通过学生t 检验获得. *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 באקומען מיט תּלמיד ס ה-פּרובירן.
צו פֿאַרשטיין די ווירקונג פון מיפּ-21 אין עקסאָסאָמע אויף אָנוווקס-פֿאַרבונדן דזשין רעגולירן, U87 סעלז זענען טראַנספעקטעד מיט אַ ינכיבאַטער פון מיפּ-21 ניצן Lipofectamine 2000 און די סעלז זענען כאַרוואַסטיד 24 שעה נאָך טראַנספעקשאַן.פאָקסאָ1 און פּ27 אויסדרוק לעוועלס אין סעלז טראַנספעקטעד מיט מיר-21 ינכיבאַטערז זענען קאַמפּערד מיט סעלז באהאנדלט מיט BV2-דערייווד עקסאָסאָומז ניצן qRT-PCR (Fig. 6A, B).טראַנספעקשאַן פון די מיר-21 ינכיבאַטער אין ו87 סעלז באטייטיק דאַונרעגיאַלייטיד פאָקסאָ1 און פּ27 אויסדרוק (FIG. 6).
RH-ינפעקטאַד עקסאָסאָומאַל BV2-דערייווד מיפּ-21 אָלטערד FoxO1 / p27 אויסדרוק אין U87 גליאָמאַ סעלז.ו87 סעלז זענען טראַנספעקטעד מיט מיפּ-21 ינכיבאַטער ניצן Lipofectamine 2000 און סעלז זענען כאַרוואַסטיד 24 שעה נאָך טראַנספעקשאַן.פאָקסאָ1 און פּ27 אויסדרוק לעוועלס אין סעלז טראַנספעקטיד מיט מיר-21 ינכיבאַטערז זענען קאַמפּערד צו לעוועלס אין סעלז באהאנדלט מיט BV2-דערייווד עקסאָסאָמע ניצן qRT-PCR (א, ב).
צו אַנטלויפן די ימיון ענטפער פון די באַלעבאָס, די טאָקסאָפּלאַסמאַ פּעראַסייט טראַנספאָרמז אין אַ געוועב סיסט.זיי פּעראַסייזיז פאַרשידן געוועבן, אַרייַנגערעכנט די מאַרך, האַרץ, און סקעלעטאַל מוסקל, איבער די לעבן פון דער באַלעבאָס און מאָדולאַטירן די ימיון ענטפער פון די באַלעבאָס.אין אַדישאַן, זיי קענען רעגולירן די צעל ציקל און אַפּאָפּטאָסיס פון באַלעבאָס סעלז, פּראַמאָוטינג זייער פּראָוליפעריישאַן14,24.טאָקסאָפּלאַסמאַ גאָנדיי פּרידאַמאַנאַנטלי ינפעקץ באַלעבאָס דענדריטיק סעלז, נעוטראָפילז און מאָנאָסיטע / מאַקראָפאַגע ייכעס, אַרייַנגערעכנט מאַרך מיקראָגליאַ.טאָקסאָפּלאַסמאַ גאָנדיי ינדוסיז די דיפערענשייישאַן פון מאַקראָפאַגעס פון די מ 2 פענאָטיפּע, אַפעקץ ווונד היילונג נאָך פּאַטאַדזשאַן ינפעקציע, און איז אויך פֿאַרבונדן מיט היפּערוואַסקיאַלעריזיישאַן און גראַנולאָמאַטאָוס פיבראָסיס.די נאַטוראַל פּאַטאַדזשענעסיס פון טאָקסאָפּלאַסמאַ ינפעקציע קען זיין שייַכות צו מאַרקערס פֿאַרבונדן מיט אָנוווקס אַנטוויקלונג.די פייַנדלעך סוויווע רעגיאַלייטאַד דורך טאָקסאָפּלאַסמאַ קען ריזעמבאַל די קאָראַספּאַנדינג פּריקאַנסער.דעריבער, עס קענען זיין אנגענומען אַז טאָקסאָפּלאַסמאַ ינפעקציע זאָל ביישטייערן צו דער אַנטוויקלונג פון מאַרך טומאָרס.אין פאַקט, הויך רייץ פון טאָקסאָפּלאַסמאַ ינפעקציע האָבן שוין רעפּאָרטעד אין די סערום פון פּאַטיענץ מיט פאַרשידן מאַרך טומאָרס.אין אַדישאַן, טאָקסאָפּלאַסמאַ גאָנדיי קען זיין אן אנדער קאַרסאַנאָודזשעניק ווירקונג און אַקט סינערדזשיסטיקלי צו העלפֿן אנדערע ינפעקטיאָוס קאַרסינאַדזשאַנז אַנטוויקלען מאַרך טומאָרס.אין דעם אַכטונג, עס איז כדאי צו באמערקן אַז P. falciparum און Epstein-Barr ווירוס סינערגיסטיק ביישטייערן צו די פאָרמירונג פון בורקיט ס לימפאָמאַ.
די ראָלע פון ​​​​עקסאָסאָמע ווי רעגיאַלייטערז אין די פעלד פון ראַק פאָרשונג איז יקסטענסיוולי ינוועסטאַגייטאַד.אָבער, די ראָלע פון ​​עקסאָסאָומז צווישן פּעראַסייץ און ינפעקטאַד מחנות בלייבט שוואַך פארשטאנען.ביז איצט, פאַרשידן רעגיאַלייטערז, אַרייַנגערעכנט סעקרעטעד פּראָטעינס, האָבן דערקלערט די בייאַלאַדזשיקאַל פּראַסעסאַז דורך וואָס פּראָטאָזאָאַן פּעראַסייץ אַנטקעגנשטעלנ אַ באַפאַלן פון די באַלעבאָס און פּערפּעטשאַווייט ינפעקציע.לעצטנס, עס איז געווען אַ גראָוינג באַגריף אַז פּראָטאָזאָאַן-פֿאַרבונדן מיקראָוועסיקלעס און זייער מיקראָרנאַס ינטעראַקט מיט באַלעבאָס סעלז צו שאַפֿן אַ גינציק סוויווע פֿאַר זייער ניצל.דעריבער, ווייַטער שטודיום זענען דארף צו אַנטדעקן די שייכות צווישן אָלטערד עקסאָסאָמאַל מירנאַס און גליאָמאַ צעל פּראָוליפעריישאַן.מיקראָרנאַ אָלטערניישאַן (קנויל גענעס מיר-30ק-1, מיר-125ב-2, מיר-23ב-27ב-24-1 און מיר-17-92) ביינדז צו די STAT3 פּראָמאָטער אין טאָקסאָפּלאַסמאַ-ינפעקטאַד מענטש מאַקראָפאַגעס, איז רעגיאַלייטאַד און ינדוסיז אַנטי -אַפּאָפּטאָסיס אין ענטפער צו טאָקסאָפּלאַסמאַ גאָנדיי ינפעקציע 29.טאָקסאָפּלאַסמאַ ינפעקציע ינקריסאַז די אויסדרוק פון מיר-17-5פּ און מיר-106ב-5פּ, וואָס זענען פארבונדן מיט עטלעכע כייפּערפּראָליפעראַטיווע חולאתן 30.די דאַטן פֿאָרשלאָגן אַז באַלעבאָס מירנאַס רעגיאַלייטאַד דורך טאָקסאָפּלאַסמאַ ינפעקציע זענען וויכטיק מאַלאַקיולז פֿאַר פּעראַסייט ניצל און פּאַטאַדזשענעסיס אין באַלעבאָס בייאַלאַדזשיקאַל נאַטור.
אָלטערד מירנאַס קענען השפּעה פאַרשידן טייפּס פון נאַטור בעשאַס די ינישייישאַן און פּראַגרעשאַן פון מאַליגנאַנט סעלז, אַרייַנגערעכנט גליאָמאַס: זיך-גענוג פון וווּקס סיגנאַלז, ינסענסיטיוויטי צו וווּקס-ינכיבאַטינג סיגנאַלז, אַפּאָפּטאָסיס אַרויסדריי, אַנלימאַטאַד רעפּליקאַטיווע פּאָטענציעל, אַנגיאָגענעסיס, ינוואַזיע און מעטאַסטאַסיס און אָנצינדונג.אין גליאָמאַ, אָלטערד מירנאַס האָבן שוין יידענאַפייד אין עטלעכע אויסדרוק פּראָפילינג שטודיום.
אין די פאָרשטעלן לערנען, מיר באשטעטיקט הויך לעוועלס פון מירנאַ-21 אויסדרוק אין טאָקסאָפּלאַסמאַ-ינפעקטאַד באַלעבאָס סעלז.מיר-21 איז יידענאַפייד ווי איינער פון די מערסט אָפט אָוווערעקספּרעססעד מיקראָרנאַס אין האַרט טומאָרס, אַרייַנגערעכנט גליאָמאַס, 33 און זיין אויסדרוק קאָראַלייץ מיט די מיינונג פון גליאָמאַ.אַקיומיאַלייטינג זאָגן סאַגדזשעסץ אַז מיר -21 איז אַ ראָמאַן אָנקאָגענע וואָס אַקט ווי אַן אַנטי-אַפּאָפּטאָטיק פאַקטאָר אין גליאָמאַ גראָוט און איז העכסט אָוווערעקספּרעססעד אין געוועבן און פּלאַזמע פון ​​מענטש מאַרך מאַליגנאַנסיז.ינטערעסטינגלי, מיר-21 ינאַקטיוויישאַן אין גליאָמאַ סעלז און געוועבן טריגערז די ינאַבישאַן פון צעל פּראָוליפעריישאַן רעכט צו קאַספּאַסע-אָפענגיק אַפּאָפּטאָסיס.ביאָינפאָרמאַטיק אַנאַליסיס פון מיר-21 פּרעדיקטעד טאַרגאַץ אנטפלעקט קייפל אָנוווקס סאַפּרעסער גענעס פֿאַרבונדן מיט אַפּאָפּטאָסיס פּאַטווייז, אַרייַנגערעכנט פּראָוגראַמד צעל טויט 4 (PDCD4), tropomyosin (TPM1), PTEN, און פאָרקעעאַד קעסטל אָ1 (FoxO1), מיט די מיר-2121 ביינדינג פּלאַץ..22.38.
פאָקסאָ1, ווי איינער פון די טראַנסקריפּציע סיבות (פאָקסאָ), איז ינוואַלווד אין דער אַנטוויקלונג פון פאַרשידן טייפּס פון מענטש ראַק און קענען רעגולירן די אויסדרוק פון אָנוווקס סאַפּרעסער גענעס אַזאַ ווי פּ21, פּ27, בים און פאַסל40.פאָקסאָ1 קענען בינדן און אַקטאַווייט ינכיבאַטערז פון צעל ציקל אַזאַ ווי פּ27 צו פאַרשטיקן צעל גראָוט.דערצו, FoxO1 איז אַ שליסל ווירקונג פון PI3K / Akt סיגנאַלינג און רעגיאַלייץ פילע בייאַלאַדזשיקאַל פּראַסעסאַז אַזאַ ווי צעל ציקל פּראַגרעשאַן און צעל דיפערענשייישאַן דורך אַקטאַוויישאַן פון פּ2742 טראַנסקריפּציע.
אין מסקנא, מיר גלויבן אַז עקסאָסאָומאַל מיר-21 דערייווד פון טאָקסאָפּלאַסמאַ-ינפעקטאַד מיקראָגליאַ קען שפּילן אַ וויכטיק ראָלע ווי אַ גראָוט רעגולאַטאָר פון גליאָמאַ סעלז (Fig. 7).אָבער, ווייַטער שטודיום זענען דארף צו געפֿינען אַ דירעקט פֿאַרבינדונג צווישן עקסאָסאָמאַל מיר-21, אָלטערד טאָקסאָפּלאַסמאַ ינפעקציע און גליאָמאַ גראָוט.די רעזולטאַטן זענען דערוואַרט צו צושטעלן אַ סטאַרטינג פונט פֿאַר לערנען די שייכות צווישן טאָקסאָפּלאַסמאַ ינפעקציע און די ינסידאַנס פון גליאָמאַ.
א סכעמאַטיש דיאַגראַמע פון ​​די מעקאַניזאַם פון גליאָמאַ (מאַרך) קאַרסינאָגענעסיס איז פארגעלייגט אין דעם לערנען.דער מחבר דראָז אין PowerPoint 2019 (Microsoft, Redmond, WA).
אַלע יקספּערמענאַל פּראָטאָקאָלס אין דעם לערנען, אַרייַנגערעכנט די נוצן פון אַנימאַלס, זענען אין לויט מיט די סעאָול נאַשאַנאַל אוניווערסיטעט כייַע זאָרגן און באַניצער קאַמיטי סטאַנדאַרד עטישע גיידליינז און זענען באוויליקט דורך די ינסטיטוטיאָנאַל איבערבליק באָרד פון די סעאָול נאַשאַנאַל אוניווערסיטעט שולע פון ​​​​מעדיסינע (IRB נומער SNU- 150715).-2).אַלע יקספּערמענאַל פּראָוסידזשערז זענען דורכגעקאָכט אין לויט מיט ARRIVE רעקאַמאַנדיישאַנז.
BV2 מויז מיקראָגליאַ און U87 מענטשלעך גליאָמאַ סעלז זענען קאַלטשערד אין Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM; Welgene, Seoul, Korea) און Roswell Park Memorial Institute's Medium (RPMI; Welgene), ריספּעקטיוולי, יעדער מיט 10% פיטאַל באָווין סערום, 4 מם ל- גלוטאַמינע, 0.2 מם פּעניסיללין און 0.05 מם סטרעפּטאָמיסין.סעלז זענען קאַלטשערד אין אַ ינגקיאַבייטער מיט 5% CO2 ביי 37 ° C.אן אנדער גליאָמאַ צעל ליניע, U118, איז געניצט פֿאַר פאַרגלייַך מיט U87 סעלז.
צו יזאָלירן עקסאָסאָמע פון ​​ט. גאָנדיי-ינפעקטאַד RH און ME49 סטריינז, T. gondii טאַטשיזאָיטעס (רה שפּאַנונג) זענען כאַרוואַסטיד פון די אַבדאָמינאַל קאַוואַטי פון 6-וואָך-אַלט BALB / C מיסע ינדזשעקטיד 3-4 טעג פריער.טאַטשיזאָיטעס זענען געוואשן דריי מאָל מיט פּבס און פּיוראַפייד דורך סענטריפוגיישאַן אין 40% פּערקאָלל (סיגמאַ-אַלדריך, סט. לאָויס, מאָ, USA)43.צו באַקומען טאַטשיזאָיטעס פון שפּאַנונג ME49, BALB / c מיסע זענען ינטראַפּעריטאָנעאַללי ינדזשעקטיד מיט 20 געוועב סיס און טאַטשיזאָיטע טראַנספאָרמאַציע אין סיס איז געזאמלט דורך וואַשינג די אַבדאָמינאַל קאַוואַטי אויף די 6-8 טאָג נאָך ינפעקציע (פּי).מיסע ינפעקטאַד מיט PBS.ME49 טאַטשיזאָיטעס זענען דערוואַקסן אין סעלז סאַפּלאַמענטאַד מיט 100 μג / מל פּעניסיללין (Gibco/BRL, Grand Island, NY, USA), 100 μg/ml Streptomycin (Gibco/BRL), און 5% פיטאַל באָווין סערום (Lonza, Walkersville, MD) .., USA) ביי 37 °C און 5% טשאַד דייאַקסייד.נאָך קאַלטיוויישאַן אין וועראָ סעלז, ME49 טאַטשיזאָיטעס זענען דורכגעגאנגען צוויי מאָל דורך אַ 25 מאָס נאָדל און דערנאָך דורך אַ 5 μm פילטער צו באַזייַטיקן דעבריס און סעלז.נאָך וואַשינג, די טאַטשיזאָיטעס זענען ריסאַספּאַנדיד אין PBS44.געוועב סיס פון טאָקסאָפּלאַסמאַ גאָנדיי שפּאַנונג ME49 זענען מיינטיינד דורך ינטראַפּעריטאָנעאַל ינדזשעקשאַן פון סיס אפגעזונדערט פון די מאַרך פון ינפעקטאַד C57BL / 6 מיסע (אָריענט ביאָ אַנימאַל צענטער, סעאָנגנאַם, קארעע).די סייכל פון ME49-ינפעקטאַד מיסע זענען כאַרוואַסטיד נאָך 3 חדשים פון פּי און מינסט אונטער אַ מיקראָסקאָפּ צו יזאָלירן סיס.די ינפעקטאַד מיסע זענען געהאלטן אונטער ספּעציעל פּאַטאַדזשאַן-פריי טנאָים (SPF) אין די סעאָול נאַשאַנאַל אוניווערסיטעט שולע פון ​​​​מעדיסינע.
גאַנץ רנאַ איז יקסטראַקטיד פון BV2-דערייווד עקסאָסאָומז, BV2 סעלז און געוועבן ניצן די מירנעאַסי מיני קיט (קיאַגען, הילדען, דייַטשלאַנד) לויט די פאַבריקאַנט ס ינסטראַקשאַנז, אַרייַנגערעכנט די ינגקיוביישאַן צייט פֿאַר די ילושאַן שריט.די רנאַ קאַנסאַנטריישאַן איז באשלאסן אויף אַ נאַנאָדראָפּ 2000 ספּעקטראָפאָטאָמעטער.די קוואַליטעט פון רנאַ מיקראָאַררייַס איז אַססעססעד מיט אַ Agilent 2100 ביאָאַנאַליזער (Agilent Technologies, Amstelveen, די נעטהערלאַנדס).
DMEM מיט 10% עקסאָסאָמע-נעבעך פבס איז געווען צוגעגרייט דורך אַלטראַסענטריפוגאַטיאָן ביי 100,000 ג פֿאַר 16 שעה ביי 4 ° C און פילטערד דורך אַ 0.22 μm פילטער (Nalgene, Rochester, NY, USA).BV2 סעלז, 5 × 105, זענען קאַלטשערד אין DMEM מיט 10% עקסאָסאָמע-דיפּליטיד פבס און 1% אַנטיביאַטיקס ביי 37 ° C און 5% CO2.נאָך 24 שעה פון ינגקיוביישאַן, טאַטשיזאָיטעס פון שפּאַנונג RH אָדער ME49 (MOI = 10) זענען מוסיף צו די סעלז און ניט-ינוויידינג פּעראַסייץ זענען אַוועקגענומען אין אַ שעה און ריפילד מיט DMEM.עקסאָסאָמעס פון BV2 סעלז זענען אפגעזונדערט דורך מאַדאַפייד דיפערענטשאַל סענטריפוגיישאַן, די מערסט וויידלי געניצט אופֿן.רעסאַספּענשאַן די עקסאָסאָמע שרייטל אין 300 μl פּבס פֿאַר רנאַ אָדער פּראָטעין אַנאַליסיס.די קאַנסאַנטריישאַן פון אפגעזונדערט עקסאָסאָומז איז באשלאסן מיט אַ BCA פּראָטעין אַסיינמאַנט ינווענטאַר (Pierce, Rockford, IL, USA) און אַ נאַנאָדראָפּ 2000 ספּעקטראָפאָטאָמעטער.
פּרעסיפּיטאַטעס פון BV2 סעלז אָדער עקסאָסאָמע דערייווד פון BV2 זענען ליסעד אין פּראָ-פּרעפּ ™ פּראָטעין יקסטראַקשאַן לייזונג (ינטראָן ביאָטעטשנאָלאָגי, סעאָנגנאַם, קארעע) און פּראָטעינס זענען לאָודיד אויף Coomassie בריליאַנט בלוי סטיינד 10% SDS פּאָליאַקרילאַמידע דזשעלז.אין דערצו, פּראָטעינס זענען טראַנספערד צו פּווודף מעמבריינז פֿאַר 2 שעה.מערב בלאַץ זענען וואַלאַדייטאַד מיט די אַליקס אַנטיבאָדי (צעל סיגנאַלינג טעכנאָלאָגיע, בעווערלי, מאַ, USA) ווי אַן עקסאָסאָומאַל מאַרקער.HRP-קאָנדזשוגאַטעד ציג אַנטי-מויז IgG (H + L) (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX, USA) און אַ LAS-1000 פּלוס לומאַנעסאַנט בילד אַנאַליזער (Fuji Photographic Film, טאָקיאָ, יאַפּאַן) זענען געניצט ווי אַ צווייטיק אַנטיבאָדי..טראַנסמיסיע עלעקטראָן מיקראָסקאָפּי איז דורכגעקאָכט צו לערנען די גרייס און מאָרפאָלאָגי פון עקסאָסאָמעס.עקסאָסאָמעס אפגעזונדערט פון BV2 סעלז (6.40 μg / μl) זענען צוגעגרייט אויף טשאַד-קאָוטאַד מעשעס און נעגאַטיוולי סטיינד מיט 2% וראַניל אַסאַטייט פֿאַר 1 מין.די צוגעגרייט סאַמפּאַלז זענען באמערקט אין אַ אַקסעלערייטינג וואָולטידזש פון 80 קוו מיט אַ JEOL 1200-EX II (טאָקיאָ, יאַפּאַן) יקוויפּט מיט אַן ES1000W Erlangshen CCD אַפּאַראַט (Gatan, Pleasanton, CA, USA).
BV2-דערייווד עקסאָסאָומז זענען סטיינד מיט די PKH26 רויט פלורעסאַנט לינקער קיט (סיגמאַ-אַלדריך, סט. לאָויס, מאָ, USA) פֿאַר 15 מינוט אין צימער טעמפּעראַטור.ו87 סעלז, 2 × 105, מיט PKH26-לייבאַלד עקסאָסאָמעס (רויט) אָדער קיין עקסאָסאָמעס ווי אַ נעגאַטיוו קאָנטראָל, זענען ינקובייטיד בייַ 37 ° C פֿאַר 24 שעה אין אַ 5% CO2 ינגקיאַבייטער.U87 צעל נוקליי זענען סטיינד מיט DAPI (בלוי), U87 סעלז זענען פאַרפעסטיקט אין 4% פּאַראַפאָרמאַלדעהידע פֿאַר 15 מינוט ביי 4 ° C און דערנאָך אַנאַלייזד אין אַ Leica TCS SP8 STED CW קאַנפאָקאַל מיקראָסקאָפּ סיסטעם (Leica Microsystems, Mannheim, דייַטשלאַנד).באמערקט.
cDNA איז געווען סינטאַסייזד פֿון סירנאַ ניצן Mir-X סירנאַ ערשטער סינטעז פון שנירל און SYBR qRT-PCR קיט (Takara Bio Inc., Shiga, יאַפּאַן).פאַקטיש צייט קוואַנטיטאַטיווע פּקר איז דורכגעקאָכט מיט די iQ5 פאַקטיש צייט פּקר דיטעקשאַן סיסטעם (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) ניצן פּרימערז און טעמפּלאַטעס געמישט מיט SYBR Premix.דנאַ איז געווען אַמפּלאַפייד פֿאַר 40 סייקאַלז פון דינאַטוראַטיאָן ביי 95 ° C פֿאַר 15 ס און אַנילינג ביי 60 ° C פֿאַר 60 ס.די דאַטן פון יעדער פּקר אָפּרוף איז אַנאַלייזד מיט די דאַטן אַנאַליסיס מאָדולע פון ​​די iQ ™ 5 אָפּטיש סיסטעם ווייכווארג (Bio-Rad).קאָרעוו ענדערונגען אין דזשין אויסדרוק צווישן אויסגעקליבן ציל גענעס און β-אַקטין / סירנאַ (און ו6) זענען קאַלקיאַלייטיד מיט די נאָרמאַל ויסבייג אופֿן.די אָנפאַנגער סיקוואַנסיז געניצט זענען געוויזן אין טאַבלע 1.
3 קס 104 ו87 גליאָמאַ סעלז זענען סידעד אין 96-געזונט פּלאַטעס און געמישט מיט טאָקסאָפּלאַסמאַ-ינפעקטאַד עקסאָסאָמע דערייווד פון בוו 2 (50 μג / מל) אָדער ניט-פּאַלס עקסאָסאָמע דערייווד פון בוו 2 (50 μג / מל) ווי קאָנטראָלס אין 12, 18 שעה און 36 שעה. .די צעל פּראָוליפעריישאַן קורס איז באשלאסן ניצן די צעל קאַונטינג קיט-8 (דאָדזשינדאָ, קומאַמאָטאָ, יאַפּאַן) (סופּפּלעמענטאַרי פיגיערז S1-S3) 46.
5-וואָך-אַלט ווייַבלעך BALB / C נאַקעט מיסע זענען פּערטשאַסט פֿון Orient Bio (Seongnam-si, דרום קארעע) און געהאלטן ינדיווידזשואַלי אין סטערילע קאַגעס אין צימער טעמפּעראַטור (22 ± 2 ° C) און הומידיטי (45 ± 15 ° C).%) אין צימער טעמפּעראַטור (22±2 °C) און הומידיטי (45±15%).א 12-שעה ליכט ציקל און אַ 12-שעה טונקל ציקל זענען דורכגעקאָכט אונטער SPF (Seoul National University School of Medicine Animal Center).מיסע זענען ראַנדאַמלי צעטיילט אין דריי גרופּעס פון 5 מיסע יעדער און אַלע גרופּעס זענען ינדזשעקטיד סובקוטאַנעאָוסלי מיט 400 מל פון פּבס מיט 1 X 107 ו87 גליאָמאַ סעלז און גראָוט פאַקטאָר רידוסט BD Matrigel ™ (BD Science, Miami, FL, USA).זעקס טעג נאָך אָנוווקס ינדזשעקשאַן, 200 מג פון עקסאָסאָמע דערייווד פון BV2 סעלז (מיט / אָן טאָקסאָפּלאַסמאַ ינפעקציע) זענען ינדזשעקטיד אין די אָנוווקס פּלאַץ.צוויי און צוואנציק טעג נאָך אָנוווקס ינפעקציע, די אָנוווקס גרייס פון מיסע אין יעדער גרופּע איז געמאסטן מיט אַ קאַליפּער דריי מאָל אַ וואָך, און די אָנוווקס באַנד איז קאַלקיאַלייטיד דורך די פאָרמולע: 0.5 × (ברייט) × 2 × לענג.
מיקראָרנאַ אויסדרוק אַנאַליסיס ניצן miRCURYTM LNA מירנאַ מענגע, 7 דור האט, ממו און רנאָ ערייז (EXIQON, Vedbaek, דענמאַרק) קאַווערינג 1119 געזונט-קעראַקטערייזד מיסע צווישן 3100 מענטש, מויז און שטשור מירנאַ כאַפּן פּראָבעס.בעשאַס דעם פּראָצעדור, 250-1000 נג פון גאַנץ רנאַ איז אַוועקגענומען פון די 5′-פאָספאַטע דורך באַהאַנדלונג מיט קאַלב ינטעסטאַנאַל אַלקאַליין פאָספאַטאַסע נאכגעגאנגען דורך לייבלינג מיט Hy3 גרין פלורעסאַנט פאַרב.די לייבאַלד סאַמפּאַלז זענען דעמאָלט כייברידייזד דורך לאָודינג מיקראָאַררייַ סליידז מיט אַ כייברידיזאַטיאָן קאַמער ינווענטאַר (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) און אַ כייברידיזאַטיאָן רוק קיט (Agilent Technologies).היברידיזאַטיאָן איז דורכגעקאָכט פֿאַר 16 שעה בייַ 56 ° C, און די מיקראָאַררייַס זענען געוואשן אין לויט מיט די רעקאַמאַנדיישאַנז פון דער פאַבריקאַנט.די פּראַסעסט מיקראָאַררייַ סליידז זענען דערנאָך סקאַנד מיט אַ Agilent G2565CA מיקראָאַררייַ סקאַננער סיסטעם (Agilent Technologies).סקאַנד בילדער זענען ימפּאָרטיד מיט Agilent Feature Extraction ווייכווארג ווערסיע 10.7.3.1 (Agilent Technologies) און די פלואָרעססענסע ינטענסיטי פון יעדער בילד איז קוואַנטאַפייד מיט די קאָראַספּאַנדינג GAL טעקע פון ​​די מאַדאַפייד עקסיקאָן פּראָטאָקאָל.מיקראָאַררייַ דאַטן פֿאַר דעם קראַנט לערנען זענען דאַפּאַזיטיד אין די GEO דאַטאַבייס אונטער אַקסעס נומער GPL32397.
אויסדרוק פּראָופיילז פון דערוואַקסן עקסאָסאָמאַל מירנאַס אין מיקראָגליאַ פון RH אָדער ME49 סטריינז ינפעקטאַד מיט טאָקסאָפּלאַסמאַ זענען אַנאַלייזד מיט פאַרשידן נעץ מכשירים.מירנאַס פֿאַרבונדן מיט אָנוווקס אַנטוויקלונג זענען יידענאַפייד מיט miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) און פילטערד מיט נאָרמאַליזעד סיגנאַל ינטענסיטי (לאָג2) העכער ווי 8.0.צווישן מירנאַס, דיפערענטשאַלי אויסגעדריקט מירנאַס זענען געפונען צו זיין מער ווי 1.5-פאַרלייגן אָלטערד דורך פילטער אַנאַליסיס פון מירנאַס אָלטערד דורך RH אָדער ME49 סטריינז ינפעקטאַד מיט T. gondii.
סעלז זענען סידעד אין זעקס-געזונט פּלאַטעס (3 X 105 סעלז / געזונט) אין אָפּטי-מעם (Gibco, Carlsbad, CA, USA) ניצן Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA).די טראַנספעקטעד סעלז זענען קאַלטשערד פֿאַר 6 שעה און דעמאָלט די מיטל איז געביטן צו פריש גאַנץ מיטל.סעלז זענען כאַרוואַסטיד 24 שעה נאָך טראַנספעקשאַן.
סטאַטיסטיש אַנאַליסיס איז געווען דער הויפּט דורכגעקאָכט מיט תּלמיד ס ה-פּרובירן מיט עקססעל ווייכווארג (Microsoft, Washington, DC, USA).פֿאַר יקספּערמענאַל כייַע אַנאַליסיס, אַ צוויי-וועג ANOVA איז דורכגעקאָכט מיט Prism 3.0 ווייכווארג (גראַפפּאַד ווייכווארג, La Jolla, CA, USA). פּ-וואַלועס <0.05 זענען גערעכנט ווי סטאַטיסטיש באַטייַטיק. P-וואַלועס <0.05 זענען גערעכנט ווי סטאַטיסטיש באַטייַטיק. Значения P <0,05 считались статистически значимыми. פּ וואַלועס <0.05 זענען געהאלטן סטאַטיסטיש באַטייַטיק. P 值< 0.05 被认为具有统计学意义。 פּ 值 < 0.05 Значения P <0,05 считались статистически значимыми. פּ וואַלועס <0.05 זענען געהאלטן סטאַטיסטיש באַטייַטיק.
אַלע יקספּערמענאַל פּראָטאָקאָלס געניצט אין דעם לערנען זענען באוויליקט דורך די ינסטיטושאַנאַל איבערבליק באָרד פון די סעאָול נאַשאַנאַל אוניווערסיטעט שולע פון ​​​​מעדיסינע (IRB נומער SNU-150715-2).
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
פורליי, י עט על.עסטימאַטעד גלאבאלע ראַק ינסידאַנס און מאָרטאַליטי אין 2018: GLOBOCAN קוואלן און מעטהאָדס.ינטערפּריטיישאַן.J. Ruck 144, 1941-1953 (2019).
Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS אַן ינסייט אין די ריזיקירן סיבות פון מאַרך טומאָרס און זייער טעראַפּיוטיק ינטערווענטשאַנז. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS אַן ינסייט אין די ריזיקירן סיבות פון מאַרך טומאָרס און זייער טעראַפּיוטיק ינטערווענטשאַנז.Rashid, S., Rehman, K. און Akash, MS א רעצענזיע פון ​​ריזיקירן סיבות פֿאַר מאַרך טומאָרס און הויפּט טעראַפּיוטיק ינטערווענטשאַנז. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS 深入了解脑肿瘤的危险因素及其治疗干预措施。 Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS טיף פארשטאנד פון מאַרך אָנוווקס ריזיקירן סיבות און טעראַפּיוטיק ינטערווענטשאַנז.Rashid, S., Rehman, K. און Akash, MS א רעצענזיע פון ​​ריזיקירן סיבות פֿאַר מאַרך טומאָרס און הויפּט טעראַפּיוטיק ינטערווענטשאַנז.ביאָמעדיקאַל וויסנשאַפֿט.אַפּטייקער.143, 112119 (2021).
Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. באַקטיריאַל-וויראַל ינטעראַקשאַנז אין מענטשלעך אָראָדיגעסטיווע און ווייַבלעך דזשענאַטאַל שעטעך קאַנסערץ: א קיצער פון עפּידעמיאָלאָגיק און לאַבאָראַטאָריע זאָגן. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. באַקטיריאַל-וויראַל ינטעראַקשאַנז אין מענטשלעך אָראָדיגעסטיווע און ווייַבלעך דזשענאַטאַל שעטעך קאַנסערץ: א קיצער פון עפּידעמיאָלאָגיק און לאַבאָראַטאָריע זאָגן.Kato I., Zhang J. און Sun J. באַקטיריאַל-וויראַל ינטעראַקשאַנז אין ראַק פון די מענטשלעך גאַסטראָוינטעסטאַנאַל שעטעך און ווייַבלעך דזשענאַטאַל שעטעך: אַ קיצער פון עפּידעמיאָלאָגיקאַל און לאַבאָראַטאָריע דאַטן. קאַטאָ, י., זשאַנג, דזש. & זון, דזש. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. באַקטעריאָ-וויראַל ינטעראַקשאַן אין מענטש מויל קאַוואַטי דיידזשעסטשאַן און ווייַבלעך רעפּראָדוקטיווע שעטעך: קיצער פון פאָלקס קרענק וויסנשאַפֿט און לאַבאָראַטאָריע זאָגן.קאַטאָ י., זשאַנג י און זון י. באַקטיריאַל-וויראַל ינטעראַקשאַנז אין מענטש גאַסטראָוינטעסטאַנאַל ראַק און ווייַבלעך דזשענאַטאַל ראַק: אַ קיצער פון עפּידעמיאָלאָגיקאַל און לאַבאָראַטאָריע דאַטן.ראַק 14, 425 (2022).
Magon, KL & Parish, JL פֿון ינפעקציע צו ראַק: ווי דנאַ אָנוווקס ווירוסעס טוישן די הויפט טשאַד און ליפּיד מאַטאַבאַליזאַם פון באַלעבאָס צעל. Magon, KL & Parish, JL פֿון ינפעקציע צו ראַק: ווי דנאַ אָנוווקס ווירוסעס טוישן די הויפט טשאַד און ליפּיד מאַטאַבאַליזאַם פון באַלעבאָס צעל.Mahon, KL און פּאַריש, JL פייער ינפעקציע צו ראַק: ווי דנאַ-באזירט אָנוווקס ווירוסעס טוישן די הויפט טשאַד און ליפּיד מאַטאַבאַליזאַם פון באַלעבאָס צעל. Magon, KL & Parish, JL 到癌症:DNA Magon, KL & Parish, JL פֿון ינפעקציע צו ראַק: ווי דנאַ אָנוווקס ווירוסעס טוישן די הויפט טשאַד און ליפּיד מאַטאַבאַליזאַם פון באַלעבאָס צעל.Mahon, KL און פּאַריש, JL פירעס ינפעקציע צו ראַק: ווי דנאַ אָנוווקס ווירוסעס טוישן די הויפט טשאַד און ליפּיד מאַטאַבאַליזאַם אין באַלעבאָס סעלז.עפענען ביאָלאָגי.11, 210004 (2021).
Correia da Costa, JM עט על.קאַטעטשאָל עסטראָגענס פון סקיסטאָסאָמעס און לעבער פלאַקס און העלמינטה-פארבונדן ראַק.פראָנט.הייס אינעווייניק.5, 444 (2014).