Giardia duodenum איז אַ פּעראַסיטיק אָרגאַניזם וואָס ז גיאַרדיאַסיס, אַ ינטעסטאַנאַל ינפעקציע ספּעציעל פּראָסט אין יונג קינדער מיט קליניש וואונדער פון שילשל.מיר האָבן פריער געמאלדן אַז עקסטראַסעללולאַר דזשי דואַדאַנאַליס טריגערז די אַקטאַוויישאַן פון ינטראַסעללולאַר אָליגאָמעריזאַטיאָן-ווי רעסעפּטאָר 3 (NLRP3) ביינדינג נוקלעאָטידעס און רעגיאַלייץ באַלעבאָס ינפלאַמאַטאָרי רעספּאָנסעס דורך עקסטראַסעללולאַר וועסיקלע (עוו) ויסשיידונג.אָבער, די פּינטלעך מאָלעקולאַר פּאַטערנז פון די פּאַטאַדזשאַן-פארבונדן דואָדענאָקאָקקאַל EV (GEV) ינוואַלווד אין דעם פּראָצעס און די ראָלע פון ​​די NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע אין גיאַרדיאַסיס איז נאָך צו זיין ילוסידאַד.
רעקאָמבינאַנט עוקאַריאָטיק אויסדרוק פּלאַסמיידז pcDNA3.1 (+) -אַלף -2 און אַלף -7.3 גיאַרדינס אין GEV זענען קאַנסטראַקטאַד, טראַנספעקטעד אין מויז ערשטיק פּעריטאָנעאַל מאַקראָפאַגעס און דיטעקטאַד דורך מעסטן די אָנצינדונג ציל מאַלאַקיול קאַספּאַסע -1.די פּ20 אויסדרוק מדרגה איז סקרינד..G. duodenalis alpha-2 און alpha-7.3 giardines זענען ערידזשנאַלי יידענאַפייד דורך מעסטן NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע (NLRP3, פּראָ-ינטערלעוקין-1 ביתא [IL-1β], פּראָ-קאַספּאַסע-1 און קאַספּאַסע-1 פּ20), יל ויסשיידונג.1β לעוועלס, אַפּאָפּטאָטיק ספּאַטיד פּראָטעין (ASC) אָליגאָמעריזיישאַן לעוועלס און ימיונאָפלורעסענט לאָוקאַלאַזיישאַן פון NLRP3 און ASC.די ראָלע פון ​​די NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע אין די פּאַטאַדזשעניקיטי פון G. duodenalis איז געווען אַססעססעד מיט מיסע אין וואָס NLRP3 אַקטאַוויישאַן איז אפגעשטעלט (NLRP3 אפגעשטעלט מיסע) און פּאַטאַלאַדזשיקאַל ענדערונגען אין גוף וואָג, דואַדאַנאַל פּעראַסיטיק מאַסע און דואַדאַנאַל געוועב זענען מאָניטאָרעד.אין אַדישאַן, מיר ינוועסטאַגייטאַד צי היאַרדינעס אַלף-2 און אַלף-7.3 ינדוסירן IL-1β ויסשיידונג אין וויוואָו דורך די NLRP3 ינפלאַמאַסאָמע און באשלאסן די ראָלע פון ​​די מאַלאַקיולז אין די פּאַטאַדזשעניקאַטי פון G. duodenalis אין מיסע.
אַלף-2 און אַלף-7.3 גיאַרדינעס ינדוסירן די אַקטאַוויישאַן פון די NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע אין וויטראָ.דאָס האָט געפֿירט צו די אַקטאַוויישאַן פון פּ20 קאַספּאַסע-1, אַ פאַרגרעסערן אין די אויסדרוק לעוועלס פון NLRP3, פּראָ-IL-1β און פּראָ-קאַספּאַסע-1 פּראָטעינס, אַ באַטייטיק פאַרגרעסערן אין IL-1β ויסשיידונג, די פאָרמירונג פון אַסאַ ספּאַץ אין די סיטאָפּלאַסם, און די ינדאַקשאַן פון ASA אָליגאָמעריזאַטיאָן.NLRP3 אָנצינדונג פּענילע אָנווער יגזאַסערייץ די פּאַטאַדזשעניקאַטי פון G. duodenalis אין מיסע.מיסע באהאנדלט מיט סיס דורך גאַוואַגע פון ​​NLRP3-בלאַקט מיסע יגזיבאַטאַד אַ געוואקסן נומער פון טראָפאָזאָיטעס און שטרענג שעדיקן צו די דואַדאַנאַל ווילי, קעראַקטערייזד דורך נעקראָטיק קריפּץ מיט שראַנגקאַן און בראַנטשינג.אין וויוואָו יקספּעראַמאַנץ האָבן געוויזן אַז גיאַרדינעס אַלף-2 און אַלף-7.3 קענען ינדוסירן ויסשיידונג פון IL-1β דורך די NLRP3 ינפלאַמאַסאָמע, און ימיונאַזיישאַן מיט גיאַרדינעס אַלף-2 און אַלף-7.3 רידוסט די פּאַטאַדזשעניקאַטי פון G. duodenalis אין מיסע.
צוזאַמען, די רעזולטאטן פון דעם לערנען פֿאָרשלאָגן אַז גיאַרדיאַ אַלף-2 און אַלף-7.3 פאַרשאַפן אַפּרעגולאַטיאָן פון אָנצינדונג פון באַלעבאָס NLRP3 און רעדוצירן די ינפעקטיוויטי פון G. duodenalis אין מיסע, וואָס זענען פּראַמאַסינג טאַרגאַץ פֿאַר פּרעווענטינג גיאַרדיאַסיס.
Giardia duodenum איז אַן עקסטראַסעללולאַר פּראָטאָזאָאַן פּעראַסייט וואָס לעבט אין די קליין קישקע און ז 280 מיליאָן קאַסעס פון גיאַרדיאַסיס מיט שילשל אַניואַלי, ספּעציעל צווישן יונגע קינדער אין דעוועלאָפּינג לענדער [1].מענטשן ווערן ינפעקטאַד דורך טרינקט וואַסער אָדער עסנוואַרג קאַנטאַמאַנייטאַד מיט מ. דואַדענום סיסט, וואָס דעמאָלט אַרייַן די מאָגן און זענען עקסקרעטעד אין די גאַסטריק דזשוסאַז.Giardia duodenum trophozoites צוטשעפּען צו די דואַדאַנאַל עפּיטהעליום, קאָזינג עקל, וואַמאַטינג, שילשל, אַבדאָמינאַל ווייטיק און וואָג אָנווער.מענטשן מיט ימיונאָודיפישאַנסי און סיסטיק פיבראָסיס זענען סאַסעפּטאַבאַל צו ינפעקציע.ינפעקציע קענען אויך פּאַסירן דורך מויל און אַנאַל געשלעכט [2].דרוגס אַזאַ ווי מעטראָנידאַזאָלע, טינידאַזאָלע און ניטאַזאָקסאַנידע זענען די בילכער באַהאַנדלונג אָפּציעס פֿאַר דואַדאַנאַל ינפעקטיאָנס [3].אָבער, די קימאָוטעראַפּי דרוגס פאַרשאַפן אַדווערס זייַט יפעקס אַזאַ ווי עקל, קאַרסינאָגענעסיס און גענאָטאָקסיסיטי [4].דעריבער, מער עפעקטיוו סטראַטעגיעס דאַרפֿן צו זיין דעוועלאָפּעד צו פאַרמייַדן G. duodenalis ינפעקציע.
ינפלאַממאַסאָמעס זענען אַ קלאַס פון סיטאָסאָליק פּראָטעין קאַמפּלעקסאַז וואָס זענען טייל פון די ינייט ימיון ענטפער, העלפּינג צו באַשיצן קעגן פּאַטאַדזשאַן ינוואַזיע און פאַרמיטלען ינפלאַמאַטאָרי רעספּאָנסעס [5].צווישן די ינפלאַמאַסאָומז, נוקלעאָטידע-ביינדינג אָליגאָמעריזאַטיאָן (NOD) רעסעפּטאָר 3 (NLRP3) נוקלעאָטידע-ביינדינג אָליגאָמעריזאַטיאָן (NLRP3) נוקלעאָטידע-ביינדינג-ווי ינפלאַממאַסאָמע איז יקסטענסיוולי געלערנט ווייַל עס קענען זיין דיטעקטאַד דורך פאַרשידן פּאַטאַדזשאַן / שעדיקן-פארבונדן מאָלעקולאַר פּאַטערנז (PAMP / DAMP), אנערקענט, אַקטאַווייץ די ינייט ימיון סיסטעם.און רעגיאַלייץ ינטעסטאַנאַל כאָומאָסטאַסיס אין פילע ינפלאַמאַטאָרי חולאתן [6,7,8].עס באשטייט פון די מוסטער דערקענונג רעסעפּטאָר (PRR) NLRP3, אַ אַדאַפּטער אַפּאָפּטאָטיק ספּאַטיד פּראָטעין (ASC), און אַ יפעקטיוואָר פּראָקאַספּאַסע-1 אָדער פּראָקאַספּאַסע-11.די NLRP3 ינפלאַמאַסאָמע אקטן ווי אַ באַלעבאָס קעגן פּאַטאַדזשאַן ינוואַזיע, ווי באמערקט אין נעאָספּאָראַ קאַנינום [9], Paracoccidioides brasiliensis [10], און לעישמאַניאַ שטודיום.[11], אָבער עס איז אויך געמאלדן אַז אַקטאַוויישאַן פון די NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע לימאַץ פּראַטעקטיוו ימיון רעספּאָנסעס און יגזאַסערבייץ קרענק פּראַגרעשאַן, פֿאַר בייַשפּיל, אין וואָרמס [12].באַזירט אויף אונדזער פריערדיקן פיינדינגז, מיר געמאלדן אַז עקסטראַסעללולאַר דזשי דואַדאַנאַליס טריגערז ינטראַסעללולאַר אַקטאַוויישאַן פון NLRP3 אָנצינדונג און מאַדזשאַלייץ באַלעבאָס ינפלאַמאַטאָרי רעספּאָנסעס דורך סעקרעטינג עקסטראַסעללולאַר וועסיקלעס (עווס) [13].אָבער, די ראָלע פון ​​די NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע אין G. duodenalis ינפעקציע אין וויוואָו בלייבט צו זיין באשלאסן.
גיאַרדינס זענען ערידזשנאַלי דיסקרייבד ווי סטראַקטשעראַל קאַמפּאָונאַנץ פון די דזשי דואַדאַנאַליס סיטאָסקעלעטאָן און שפּילן אַ וויכטיק ראָלע אין טראָפאָזאָיטע מאָוטיליטי און עפּיטהעליאַל צעל אַטאַטשמאַנט אין די קליין קישקע.צו בעסער אַדאַפּט צו די סוויווע און פאַרגרעסערן זייער פּאַטאַדזשעניקאַטי, G. duodenalis טראָפאָזאָיטעס דעוועלאָפּעד אַ יינציק סיטאָסקעלעטאַל סטרוקטור קאַנסיסטינג פון 8 פלאַגעללאַ, 1 מיטל גוף און 1 ווענטראַל דיסק [14].די טראָפאָזאָיטעס פון Giardia duodenum נוצן זייער סיטאָסקעלעטאָן צו דורכנעמען די אויבערשטער קליין קישקע, ספּעציעל די דואַדאַנאַם, און צוטשעפּען צו ענטעראָסיטעס.זיי קעסיידער מייגרייט און צוטשעפּען צו עפּיטעליאַל סעלז ניצן צעל מאַטאַבאַליזאַם.דעריבער, עס איז אַ נאָענט שייכות צווישן זייער סיטאָסקעלעטאָן און ווירולענסע.Giardines ספּעציפיש פֿאַר Giardia duodenum זענען קאַמפּאָונאַנץ פון די סיטאָסקעלעטאָן סטרוקטור [15] און זענען צעטיילט אין פיר קלאסן: α-, β-, γ-, און δ-גיאַרדינעס.עס זענען 21 מיטגלידער פון דער α-גיאַרדין משפּחה, וואָס אַלע האָבן אַ קאַלסיום-אָפענגיק פיייקייט צו בינדן פאָספאָליפּידס [16].זיי אויך פאַרבינדן די סיטאָסקעלעטאָן צו די צעל מעמבראַנע.אין מענטשן מיט שילשל געפֿירט דורך G. duodenalis, α-גיאַרדינס זענען העכסט אויסגעדריקט און ימיונאָראַקטיווע בעשאַס ינפעקציע [17].העטעראָלאָגאָוס וואַקסינז באזירט אויף Giardia alfa-1 פּראָטעקטעד קעגן גיאַרדיאַסיס אין מיסע און זענען פּאָטענציעל קאַנדידאַט אַנטיגענס פֿאַר וואַקסאַניישאַן אַנטוויקלונג [18].אַלף-8 גיאַרדין, לאָוקאַלייזד אין די פּלאַזמע מעמבראַנע און פלאַגעללאַ, אָבער נישט אין די ווענטראַל דיסק, ימפּרוווז די מאָוטיליטי און וווּקס קורס פון טראָפאָזאָיטעס אין G. duodenalis [19].אַלף-14 גיאַרדין אַטאַטשיז צו מיקראָטובולע ​​סטראַקטשערז אויף פלאַגעללאַ און אַפעקץ די ווייאַבילאַטי פון G. duodenalis [20].אַלף-11 גיאַרדינע איז פאָרשטעלן אין שעפע איבער די לעבן ציקל, און אָוווערעקספּרעססיאָן פון אַלף-11 גיאַרדינע דאַמידזשיז G. duodenalis זיך [21].אָבער, עס איז ומקלאָר צי אַלף-2 גיאַרדינע און אַלף-7.3 גיאַרדינע זענען פּראַטעקטיוו קעגן G. duodenalis ינפעקציע און זייער אַנדערלייינג מעקאַניזאַמז.
אין דעם לערנען, רעקאָמבינאַנט עוקאַריאָטיק אויסדרוק פּלאַזמידס pcDNA3.1 (+) -אַלף -2 גיאַרדינע און פּקדנאַ3.1 (+) -אַלף -7.3 גיאַרדינע זענען טראַנספעקטעד אין מויז ערשטיק פּעריטאָנעאַל מאַקראָפאַגעס צו אַקטאַווייט באַלעבאָס NLRP3.ינפלאַממאַסאָמע טאַרגאַץ זענען דעמאָלט סקרינד.מיר אויך אַססעססעד די ראָלע פון ​​די NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע אין די פּאַטאַדזשעניקיטי פון G. duodenalis, ינוועסטאַגייטאַד צי אַלף-2 און אַלף-7,3 גיאַרדינעס ינדוסירן אַקטאַוויישאַן פון די NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע אין וויוואָו, און באשלאסן אַז די צוויי ראָלעס פון גיאַרדינז אין די פּאַטאַדזשעניק G. Duodenalis.אונדזער פּראָסט ציל איז געווען צו אַנטוויקלען פּראַמאַסינג טאַרגאַץ פֿאַר דער פאַרהיטונג פון G. duodenalis ינפעקציע.
ווילד טיפּ (WT) C57BL / 6 ווייַבלעך מיסע אַלט 5-8 וואָכן זענען פּערטשאַסט פֿון ליאַאָנינג טשאַנגשענג עקספּערימענטאַל אַנימאַל צענטער (ליאַנינג, טשיינאַ).מיסע האָבן פֿרייַ אַקסעס צו וואַסער, באקומען סטעראַלייזד עסנוואַרג און זענען געהאלטן אין אַ 12/12 שעה ליכט / טונקל ציקל.איידער די ינפעקציע, מיסע באקומען אַנטיביאַטיקס אַד ליביטום אין טרינקט וואַסער סאַפּלאַמענטאַד מיט אַמפּיסיללין (1 מג / מל), וואַנקאָמיסין (1 מג / מל) און נעאָמיסין (1.4 מג / מל) (אַלע געקויפט פון שאַנגהאַי, טשיינאַ, קינסטלעך אָרגאַניזאַמז) [22] ].].מיסע וואָס האָבן פאַרלאָרן די פיייקייט צו עסן און טרינקען פֿאַר> 24 שעה און פאַרפאַלן ≥ 20% גוף וואָג זענען כיומאַנאַלי יוטאַנייזד דורך סערוואַקאַל דיסלאָוקיישאַן.
WB G. duodenalis trophozoites (אמעריקאנער טיפּ קולטור קאַלעקשאַן, מאַנאַסאַס, USA) זענען סאַפּלאַמענטאַד מיט 12.5% ​​פיטאַל באָווין סערום (פבס; יעדער גרין, זשעדזשיאַנג, טשיינאַ) און 0.1% באָווין בייל (סיגמאַ-אַלדריך, סט. מאַזעראַ, USA) ).USA) אונטער מיקראָעראָביק טנאָים.קאָנפלוענט טראָפאָזאָיטעס זענען געזאמלט אויף אייז און דורכגעגאנגען אין אַ פאַרהעלטעניש פון 1:4 פֿאַר ווייַטער רעפּראָדוקציע.
גיאַרדיאַ דואַדאַנאַם סיס זענען ינדוסט ווי דיסקרייבד פריער [23], טראָפאָזאָיטעס זענען כאַרוואַסטיד אין לאָגאַריטהמיק פאַסע און דעמאָלט דיילוטאַד מיט ענקאַפּסולאַטיאָן ינדוסינג מיטל, pH 7.1 (מאַדיפיעד TYI-S-33) צו אַ לעצט קאַנסאַנטריישאַן פון 1 × 106 טראָפאָזאָיטעס / מל.בייל קאַנסאַנטריישאַן 0.05% מיטל).טראָפאָזאָיטעס זענען קאַלטשערד אונטער אַנעראָוביק טנאָים ביי 37 ° C ביז די לאָגאַריטהמיק גראָוט פאַסע.טוישן די מיטל צו סיסט ינדוסינג מיטל (pH 7.8; מאַדאַפייד טי-ס-33 מיטל מיט 1% בייל קאַנסאַנטריישאַן) און קולטור דזשי דואַדאַנאַלי ביי 37 ° C פֿאַר 48-96 שעה, בעשאַס וואָס די פאָרמירונג סיס זענען באמערקט אונטער אַ מיקראָסקאָפּ.נאָך רובֿ פון די טראָפאָזאָיטעס האָבן שוין ינדוסט צו פאָרעם סיס, די קולטור געמיש איז כאַרוואַסטיד און ריסאַספּאַנדיד אין סטערילע דייאָניזעד וואַסער צו ליס די רוען טראָפאָזאָיטעס.סיס זענען גערעכנט און סטאָרד ביי 4 ° C פֿאַר סאַבסאַקוואַנט אַנאַליזעס דורך אַ גאַסטריק רער אין מיסע.
גיאַרדיאַ עקסטראַסעללולאַר וועסיקלעס (געוו) זענען ענריטשט ווי פריער דיסקרייבד [13].טראָפאָזאָיטעס אין לאָגאַריטהמיק גראָוט פאַסע זענען ריסאַספּאַנדיד אין מאַדאַפייד TYI-S-33 מיטל צוגעגרייט מיט עקסאָסאָמע-דיפּליטיד פבס (ביאָלאָגיקאַל ינדאַסטריז, בית-האַעמעק, ישראל) צו אַ לעצט קאַנסאַנטריישאַן פון 1 × 106 פּעראַסייץ / מל און ינקובייטיד פֿאַר 12 שעה.זיי זענען אפגעזונדערט פון די קולטור סופּערנאַטאַנט דורך סענטריפוגיישאַן ביי 2000 ג פֿאַר 10 מינוט, 10,000 ג פֿאַר 45 מינוט, און 100,000 ג פֿאַר 60 מינוט.פּרעסיפּיטאַטעס זענען צעלאָזן אין פאָספאַטע באַפערד סאַלין (PBS), קוואַנטאַפייד מיט אַ BCA פּראָטעין אַסאָוסייישאַן ינווענטאַר (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) און סטאָרד ביי -80 ° סי אָדער געוויינט גלייַך פֿאַר ווייַטער אַנאַליזעס.
ערשטיק מויז פּעריטאָנעאַל מאַקראָפאַגעס זענען צוגעגרייט ווי דיסקרייבד פריער [24].בעקיצער, מיסע (אַלט 6-8 וואָכן) זענען ינדזשעקטיד (ינטראַפּעריטאָנעאַללי [יפּ]) מיט 2.5 מל פון 2.98% Difco פליסיק טהיאָגליקאָל מיטל (בד, Franklin Lakes, NJ, USA) און פאסטעכער 3-4 פּאַלאַץ.א סאַספּענשאַן פון מאַקראָפאַגעס איז געזאמלט פון די אַבדאָמינאַל קאַוואַטי פון מיסע נאָך יוטאַניישאַן און סענטריפוגעד 3 מאל ביי 1000 ג פֿאַר 10 מינוט.כאַרוואַסטיד סעלז זענען דיטעקטאַד דורך לויפן סיטאָמעטרי ניצן די CD11b מאַרקער ביז צעל ריינקייַט איז געווען> 98%, דעמאָלט צוגעגעבן צו 6-געזעלן צעל קולטור פּלאַטעס (4.5 X 106 סעלז / געזונט) און ינקובייטיד מיט 10% FBS (ביאָי ינדוסטרי) ביי 37 ° C.און 5% CO2.
רנאַ איז יקסטראַקטיד פון 1 × 107 טראָפאָזאָיטעס אין 1 מל פון טריזאָל רייידזשאַנט (וואַזימע, נאַנדזשינג, טשיינאַ), גענאָמיק דנאַ איז יקסטראַקטיד פון גאַנץ G. duodenalis רנאַ ניצן MonScript dsDNase (מאָנאַד, וווהאַן, טשיינאַ) און קאַמפּלאַמענטשי דנאַ (קדנאַ) איז סינטאַסייזד. ניצן MonScript RTIIII Super Mix (Monad) לויט די ינסטראַקשאַנז פון דער פאַבריקאַנט.
CDS סיקוואַנס אינפֿאָרמאַציע פֿאַר די ציל G. duodenalis דזשין איז באקומען פון די NCBI GenBank.ניצן Primer 5.0 צו פּלאַן ספּעציפיש סימלאַס קלאָונינג פּרימערז פֿאַר יעדער ציל דזשין.די פאָרויס אָנפאַנגער (5′-3′) באשטייט פון דריי פּאַרץ: אַ אָוווערלאַפּינג סיקוואַנס מיט אַ לינעאַרייזד וועקטאָר פּקדנאַ3.1 (+) EcoRV (TGGTGGAATTCTGCAGAT) און אָנהייב קאָדאָנס ATG און GNN (אויב דער ערשטער באַזע איז נישט G).דאָס איז געטאן צו פֿאַרבעסערן די עפעקטיווקייַט פון דער אויסדרוק.אין דערצו, בייַ מינדסטער 16 בפּ קאַמביינד באַסעס (גק צופרידן 40-60% / טם אַפּפּראָקס. 55 °C).דער פאַרקערט אָנפאַנגער (5′-3′) באשטייט פון צוויי טיילן, אַ אָוווערלאַפּינג סיקוואַנס מיט אַן EcoRV-לינעאַרייזד וועקטאָר פּקדנאַ3.1 (+) (GCCGCCACTGTGCTGGAT) און אַ קאַמביינד באַזע פון ​​בייַ מינדסטער 16 בפּ.(אויסגערעכנט די לעצטע צוויי סטאַפּס).באַסעס) אַ קאָדאָן אַזאַ ווי אַאַ אָדער גאַ צו לאָזן רעקאָמבינאַנט פּלאַסמיידז צו אויסדריקן זייער לייבאַלד פּראָטעינס).די אָנפאַנגער סיקוואַנסיז זענען ליסטעד אין טאַבלע 1 און זענען סינטאַסייזד דורך Kangmet Biotechnology Co., Ltd (Changchun, טשיינאַ).
טאַרגאַץ זענען אַמפּלאַפייד ניצן פּפו דנאַ פּאָלימעראַסע (טיאַנגען, בעידזשינג, טשיינאַ) אָדער עקס-טאַק (טאַקאַראַ ביאָמעדיקאַל טעכנאָלאָגיע [בעידזשינג] קאָו, לטד, בעידזשינג, טשיינאַ) ניצן צוגעגרייט G. duodenalis cDNA ווי אַ מוסטער.די עוקאַריאָטיק אויסדרוק וועקטאָר פּלאַסמיד פּקדנאַ 3.1 (+) איז געווען לינעאַרייזד מיט ריסטריקשאַן ענזיים EcoRV און דעפאָספאָרילאַטעד ניצן פאַסט אַפּ (טהערמאָ פישער ססיענטיפיק).לינעאַריזעד פּקדנאַ3.1 (+) פראַגמאַנץ און אַמפּלאַפייד ציל דזשין פראַגמאַנץ זענען פּיוראַפייד מיט אַ דנאַ געל רייניקונג קיט (טיאַנגען) און קוואַנטאַפייד מיט אַ נאַנאָדראָפּ נד-2000 (טהערמאָ פישער ססיענטיפיק).די pcDNA3.1 (+) פראַגמענט און יעדער ציל דזשין פראַגמענט זענען ריקאָמביינד ניצן MonClone איין פֿאַרזאַמלונג קלאָונינג מישן (Monad Biotech Co., Ltd., Suzhou, טשיינאַ) און באשטעטיקט דורך דנאַ סיקוואַנסינג מיט Comate Bioscience Company Limited (Changchun, טשיינאַ)..
ענדאָטאָקסין-פֿרייַ פּלאַסמיידז pcDNA3.1 (+) -אַלף -2 און פּקדנאַ3.1 (+) -אַלף -7.3 זענען דזשענערייטאַד מיט די SanPrep ענדאָטאָקסין-פֿרייַ פּלאַסמיד מיני קיט (סאַנגאָן ביאָטעטש).די קאַנסאַנטריישאַן איז געווען מיינטיינד העכער 500 נג / μל צו ענשור אַז די עדטאַ אין די ילושאַן באַפער האט נישט אַרייַנמישנ זיך מיט די טראַנספעקשאַן אַסייַ.ערשטיק מויז פּעריטאָנעאַל מאַקראָפאַגעס זענען קאַלטשערד אין 6-געזונט פּלאַטעס מיט גאַנץ RPMI 1640 מיטל (ביאָלאָגיקאַל ינדאַסטריז) פֿאַר 12 שעה, און די סעלז זענען געוואשן 3 מאל אין וואַרעם פּבס צו באַזייַטיקן פּעניסיללין און סטרעפּטאָמיסין, און דעמאָלט אין מיטל סאַפּלאַמענטאַד מיט גאַנץ מיטל.ענדאָטאָקסין-פֿרייַ פּלאַסמיידז pcDNA3.1(+)-alpha-2 און pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 (2.5 μg) זענען דיילוטאַד אין 125 μl Opti-MEM רידוסט סערום מיטל (Gibco, Thermo Fisher Scientific)..דערנאָך 5 μל ליפּאָפעקטאַמינע 2000 טראַנספעקשאַן רייידזשאַנט (ינוויטראָגען, טהערמאָ פישער ססיענטיפיק) איז דיילוטאַד אין 125 μל פון נידעריק סערום אָפּטי-מעם מיטל.צוגרייטן ליפּאָסאָם-דנאַ קאַמפּלעקסאַז דורך מיקסינג די דיילוטאַד ענדאָטאָקסין-פֿרייַ פּלאַזמיד מיט ליפּאָפעקטאַמינע 2000 און אַלאַוינג די געמיש צו שטיין אין צימער טעמפּעראַטור פֿאַר 5 מינוט.אַריבערפירן די קאַמפּלעקסאַז סעפּעראַטלי צו סעלז אין יעדער געזונט און מישן סלאָולי.נאָך 4 שעה, די צעל קולטור מיטל איז ריפּלייסט מיט 2 מל פון גאַנץ RPMI 1640 מיטל און קולטור איז פארבליבן פֿאַר 24 שעה.פריש צעל קולטור מיטל איז מוסיף צו די סעלז און ינקובייטיד פֿאַר פאַרשידן צייט ווייזט דיפּענדינג אויף די אַסיי פּלאַן.
פּראָטעין סאַמפּאַלז פון סופּערנאַטאַנץ און צעל ליסאַטעס זענען צוגעגרייט ווי דיסקרייבד פריער [25].מעמבראַנע אַריבערפירן פּאַראַמעטערס פֿאַר פּראָ-IL-1β, פּראָ-קאַספּאַסע-1, קאַספּאַסע-1 פּ20, NLRP3, β-אַקטין און His-tag זענען 200 מאַ / 90 מין.פֿאַר ינטערלעוקין 1β (IL-1β; ר & די סיסטעמס, מיננעאַפּאָליס, מיננעסאָטאַ, USA), קאַספּאַסע-1 (פּ20) (אַדיפּאָגען, שווייץ) און נלרפּ3 (אַדיפּאָגען סאַ, עפּאַלינגעס, שווייץ) און 1:5000 טאַרגאַטינג זיין קוויטל (אַמילעט ססיענטיפיק, וווהאַן, טשיינאַ) און β-אַקטין (פּראָטעינטעטש, וווהאַן, טשיינאַ).
קרייַז-פֿאַרבינדונג מיט דיסוקסינימידע סובעראַטע (דסס) איז דורכגעקאָכט ווי דיסקרייבד פריער [26].סעלז זענען געוואשן 3 מאל מיט קאַלט פּבס און גאָר ליסעד מיט אַ 27 מאָס נאָדל אין 50 μל אַסק אָפּרוף באַפער (pH 8.0) מיט 25 מם נאַ2פּאָ4, 187.5 מם נאַקל, 25 מם העפּעס און 125 מם נאַהקאָ3.דער געמיש איז געווען סענטריפוגדעד ביי 5000 ג פֿאַר 3 מינוט און די שרייטל איז סוטשערד מיט 10 μl דסס (25 מם אין DMSO) און 40 μl ASC אָפּרוף באַפער פֿאַר 30 מינוט ביי 37 ° C.נאָך סענטריפוגאַטיאָן ביי 5000 ג פֿאַר 10 מינוט, די שרייטל איז געווען צעלאָזן אין אַ לייזונג פון 40 μל פון אַסק אָפּרוף באַפער און 10 μל פון 6 קס פּראָטעין לאָודינג באַפער (טראַנסגען, בעידזשינג, טשיינאַ), און די לייזונג איז קווענטשעד אין צימער טעמפּעראַטור פֿאַר 15. מין., דעמאָלט קאָכן 10 מינוט.פּראָטעין סאַמפּאַלז זענען דערנאָך אונטערטעניק צו מערב בלאָטינג מיט ערשטיק אַנטי-אַסק אַנטיבאָדיעס (וואַנליביאָ, שעניאַנג, טשיינאַ) אין אַ דיילושאַן פאַרהעלטעניש פון 1:500.
נאָך אַ פריער דיסקרייבד פּראָצעדור [13], סופּערנאַטאַנץ פון צעל קולטור זענען כאַרוואַסטיד און ויסשיידונג פון די פּראָ-ינפלאַמאַטאָרי סיטאָקינע IL-1β איז באשלאסן מיט די מויז IL-1 Beta ELISA קיט (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific).גער OD450nm וואַלועס צו פּראָטעין קאַנסאַנטריישאַנז מיט די IL-1β נאָרמאַל ויסבייג.
סעלז קאָוטאַד אויף קאָווערסליפּס זענען דזשענטלי געוואשן 3 מאל אין וואַרעם פּבס, פאַרפעסטיקט אין געוועב צעל פיקסאַטיוו (ביאָסאַרפּ, בעידזשינג, טשיינאַ) פֿאַר 10 מינוט אין צימער טעמפּעראַטור (רט), אין 0.1% טריטאָן רענטגענ-פּערמעאַביליזע ביי 100 (דיילוטאַד אין פּבס; ביאָסשאַרפּ) ) פֿאַר 20 מינוט אין צימער טעמפּעראַטור און פאַרשפּאַרן אין 5% באָווין סערום אַלבומין (אין פּבס) פֿאַר 2 שעה אין צימער טעמפּעראַטור.סעלז זענען דעמאָלט ינקובייטיד יבערנאַכטיק ביי 4 ° C מיט ערשטיק אַנטיבאָדיעס קעגן ASC (1: 100 דיילושאַן) אָדער NLRP3 (1: 100 דיילושאַן), ריספּעקטיוולי, און Cy3 לייבאַלד ציג אַנטי-קיניגל IgG (H + L) (1: 400; EarthOx) , סאַן פֿראַנסיסקאָ, CA, USA) אָדער FITC-קאָנדזשוגאַטעד ציג אַנטי-מויז יגג (1:400; עאַרטהאָקס) יבערנאַכטיק ביי 37 ° C אין דער פינצטער פֿאַר 1 שעה.די נוקליי זענען סטיינד מיט Hoechst 33258 (10 μג / מל; UE, Suzhou, טשיינאַ) פֿאַר 5 מינוט און באמערקט אונטער אַ פלורעסאַנס מיקראָסקאָפּ (אָלימפּוס קאָרפּאָראַטיאָן, טאָקיאָ, יאַפּאַן).
מיסע זענען צעטיילט אין פיר גרופּעס (n = 7 אין יעדער גרופּע): (איך) פּבס-באהאנדלט נעגאַטיוו קאָנטראָל גרופּע (בלויז פּבס; גאַוואַגע 100 μl / מויז PBS נאכגעגאנגען דורך טעגלעך ינטראַפּעריטאָנעאַל ינדזשעקשאַן 100 μl / מויז PBS 3 שעה שפּעטער)., קאַנטיניואַסלי פֿאַר 7 טעג);(ii) נעגאַטיוו קאָנטראָל גרופּע באהאנדלט מיט MCC950 ינכיבאַטער [27] (100 μl / מויז דורך פּבס גאַוואַגע, 3 שעה שפּעטער, 10 מג / קג גוף וואָג [BW] MCC950 [אין PBS] איז געווען אַדמינאַסטערד ינטראַפּעריטאָנעאַללי טעגלעך, געדויער 7 טעג);(iii) G. duodenalis סיסט ינפעקציע גרופּע (1.5 רענטגענ 106 סיס / מויז דורך גאַוואַגע, 3 שעה שפּעטער, 100 μל / מויז פּבס ינטראַפּעריטאָנעאַללי אַדמינאַסטערד טעגלעך פֿאַר 7 טעג);(יוו) דזשי דואַדאַנאַליס סיסט קאַמביינד ינפעקציע גרופּע MCC950 ינכיבאַטער באַהאַנדלונג גרופּע (1.5 × 106 סיס / מויז דורך גאַוואַגע, 10 מג / קג גוף וואָג MCC950 ינטראַפּעריטאָנעאַללי טעגלעך פֿאַר 7 טעג אין 3 ה).די גוף וואָג פון יעדער מויז איז מאָניטאָרעד טעגלעך און אַלע מיסע זענען יוטאַנייזד אויף די 7 טאָג.כאַרוואַסטיד דואַדאַנאַם (קסנומקס סענטימעטער לאַנג) איז געווען שנייַדן אין קליין ברעקלעך אין קסנומקס מל פּבס, סיס זענען חרובֿ יבערנאַכטיק אין פּבס בייַ קסנומקס ° C, און G. duodenalis trophozoites.פריש דואַדענום (1 ​​סענטימעטער לאַנג) איז אפגעזונדערט פֿאַר העמאַטאָקסילין און עאָסין (ה & E) סטיינינג.
מיסע זענען צעטיילט אין צוויי גרופּעס: (i) MCK קאָנטראָל גרופּע און (ii) MCC950 ינכיבאַטער גרופּע.עס זענען געווען פינף טריטמאַנץ אין יעדער גרופּע (n = 7 / באַהאַנדלונג גרופּע): (איך) פּבס באַהאַנדלונג נעגאַטיוו קאָנטראָל גרופּע (בלויז PBS; 100 μl / מויז PBS, ינטראַמוסקולאַר (ימ) ינדזשעקשאַן (טיביאַליס אַנטיריער) [28, 29] ;( וו) פּקדנאַ3.1 (+) פּלאַזמיד נעגאַטיוו קאָנטראָל גרופּע (100 μג / מויז דנאַ, דורך ינטראַמוסקולאַר ינדזשעקשאַן (iii) G. duodenalis סיסט ינפעקציע positive קאָנטראָל גרופּע (1.5 רענטגענ 106 סיס / מויז, דורך גאַוואַגע) אַ; גרופּע באהאנדלט מיט פּלאַזמיד פּקדנאַ3.1 (+)-אַלף-2 (100 μג / מויז דנאַ, דורך ינטראַמוסקולאַר ינדזשעקשאַן), און (וו) אַ גרופּע באהאנדלט מיט פּלאַזמיד פּקדנאַ3.1 (+)-אַלף-7.3 (100 μג / מויז) דנאַ, נאָך 12 שעה פון דורכפאָר, מיסע אין די MCC950 ינכיבאַטער גרופּע באקומען אַ טעגלעך ינטראַפּעריטאָנעאַל ינדזשעקשאַן פון MCC950 (10 מג / קג גוף וואָג) פֿאַר 7 טעג, בשעת מיסע אין די MOCK גרופּע באקומען אַן גלייַך באַנד פון פּבס באַהאַנדלונג. געזאמלט פון די ייבאָלז מיסע און לינקס יבערנאַכטיק ביי 4 ° C סערום סאַמפּאַלז זענען אפגעזונדערט מיט ענזיים-לינגקט ימיונאָסאָרבענט אַסייַ (ELISA) פֿאַר און מעזשערמאַנץ פון IL-1β לעוועלס.
פינף און דרייסיק מיסע זענען צעטיילט אין פינף גרופּעס (n = 7 / גרופּע).גרופע 1 איז געווען אַ נעגאַטיוו קאָנטראָל גרופּע באהאנדלט מיט פּבס: מיסע באקומען 100 μל פון פּבס ינטראַמוסקולאַרלי און 3 טעג שפּעטער דורך גאַוואַגע.גרופע 2 איז אַ positive קאָנטראָל גרופּע ינפעקטאַד מיט דזשי דואַדאַנאַליס סיס: מיסע זענען ינדזשעקטיד מיט 100 μל פון פּבס, און 3 טעג שפּעטער 1.5 רענטגענ 106 סיס / מויז זענען ינדזשעקטיד ינטראַגאַסטריקאַללי.דריט גרופּע - פּלאַזמיד ימיונאַזיישאַן מיט pcDNA3.1 (+) אין קאָמבינאַציע מיט אַ קאָנטראָל גרופּע פֿאַר דואַדאַנאַל סיסט ינפעקציע: מיסע באקומען 100 μג פון פּלאַזמיד דנאַ pcDNA3.1 (+) (ים) מויל, 1.5 × 106 סיס / מויז 3 פֿאַר עטלעכע טעג.גרופּעס 4 און 5 זענען רעקאָמבינאַנט פּקדנאַ3.1(+)-אַלף-2 גיאַרדינע פּלאַסמיד אָדער פּקדנאַ3.1(+)-אַלף-7.3 גיאַרדינע פּלאַזמיד אין קאָמבינאַציע מיט דזשי דואַדינאַליס סיסט ינפעקציע.עקספּערימענטאַל גרופּע: מיסע באקומען 100 μג פון פּקדנאַ3.1 (+) -גיאַרדינע פּלאַסמיד דנאַ (ים), און 3 טעג שפּעטער, 1.5 × 106 סיס / מויז זענען ינדזשעקטיד דורך גאַוואַגע.דער גוף וואָג פון יעדער מויז איז מאָניטאָרעד נאָך די הקדמה פון די דזשי דואַדאַנאַליס סיסט דורך די רער.פריש דואַדאַנאַם איז געזאמלט פֿאַר פּעראַסיטיק מאַסע מעזשערמאַנץ און הע סטיינינג אַנאַליסיס.
היסטאָפּאַטהאָלאָגיקאַל ענדערונגען זענען אַנאַלייזד לויט אַ פריער ארויס פּראָצעדור [30].פריש דואַדענום איז געווען פאַרפעסטיקט מיט געוועב צעל פיקסאַטיוו, עמבעדיד אין פּעראַפאַן, שנייַדן אין 4 μם סעקשאַנז, סטיינד מיט H&E און אַנאַלייזד אונטער אַ ליכט מיקראָסקאָפּ.רעפּריזענאַטיוו פּאַטאַלאַדזשיקאַל ענדערונגען אין זיבן געוועב סעקשאַנז פון זיבן פרייַ מיסע זענען עוואַלואַטעד דורך אַ פּאַטאַלאַדזשיסט ניט וויסנדיק פון די באַהאַנדלונג און זענען קאַפּטשערד אין 200 קס מאַגנאַפאַקיישאַן.די לענג פון די ווילי און די טיפקייַט פון די קריפּץ זענען געמאסטן אין לויט מיט די פריער דיסקרייבד מעטהאָדס.
די רעזולטאַטן אין וויטראָ און אין וויוואָו זענען באקומען אין טריפּליקאַט.גראַפס זענען דזשענערייטאַד מיט GraphPad Prism 7.00 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, USA).דיפעראַנסיז צווישן צוויי גרופּעס זענען אַנאַלייזד דורך ה-פּרובירן, בשעת דיפעראַנסיז צווישן ≥3 גרופּעס זענען אַנאַלייזד דורך איין-וועג אַנאַליסיס פון וועריאַנס (ANOVA) ניצן SPSS ווייכווארג (ווערסיע 22.0; SPSS IBM Corp., Armonk, NY, USA).דאַטן זענען אַנאַלייזד פֿאַר כאָומאַדזשיניאַטי פון וועריאַנס ניצן Levene ס פּרובירן נאכגעגאנגען דורך Bonferroni ס פּאָסט האָק פּרובירן (ב).באַטייַט איז אויסגעדריקט ווי P <0.05, P <0.01, און P <0.001 (ניט באַטייַטיק [ns]) (P> 0.05).
אונדזער פריערדיקן אַנאַליסיס פון GEV פּראָטעאָמיקס אין די קיאָטאָ ענציקלאָפּעדיע פון ​​גענעס און גענאָמעס (KEGG) געוויזן אַז פילע טאַרגאַץ קען זיין ינוואַלווד אין די אַקטאַוויישאַן פון ינפלאַמאַטאָרי סיגנאַלינג פּאַטווייז [13].מיר האָבן אויסגעקליבן צוויי פּראַמאַסינג טאַרגאַץ, אַלף-2 און אַלף-7.3 גיאַרדינס, אַמפּלאַפיי די מאַלאַקיולז און נוצן זיי צו בויען די pcDNA3.1 (+) עוקאַריאָטיק אויסדרוק וועקטאָר.נאָך סיקוואַנסינג, רעקאָמבינאַנט פּקדנאַ3.1 (+) -אַלף -2 און אַלף-7.3 גיאַרדינע אויסדרוק פּלאַזמידס זענען טראַנספעקטעד אין ערשטיק מויז פּעריטאָנעאַל מאַקראָפאַגעס, און די קאַספּאַסע-1 פּ20 סיגנאַטורע פּראָטעין פון אָנצינדונג (אַ פראַגמענט פון אַקטיווייטיד קאַספּאַסע -1) איז יידענאַפייד. ווי ילוסאַדייטינג שליסל מאַלאַקיולז וואָס קענען צינגל אָנצינדונג.די רעזולטאַטן געוויזן אַז אַלף-2 און אַלף-7.3 גיאַרדינעס קענען ינדוסירן פּ20 קאַספּאַסע-1 אויסדרוק ענלעך צו GEV.קיין ווירקונג אויף קאַספּאַסע-1 אַקטאַוויישאַן איז געפֿונען אין די אַנטריטיד נעגאַטיוו קאָנטראָל (בלויז פּבס) און פּלאַזמיד קאָנטראָל pcDNA3.1 (+) (פיגורע 1).
מעאַסורעמענט פון פּ20 קאַספּאַסע-1 אַקטאַוויישאַן דורך pcDNA3.1 (+) -אַלף -2 און אַלף -7.3 גיאַרדינס.רעקאָמבינאַנט עוקאַריאָטיק אויסדרוק פּלאַסמיידז pcDNA3.1 (+) -אַלף -2 און אַלף -7.3 גיאַרדינעס (אויבן יעדער שטעג) זענען טראַנספעקטעד אין ערשטיק מויז פּעריטאָנעאַל מאַקראָפאַגעס און קולטור סופּערנאַטאַנץ זענען כאַרוואַסטיד 24 שעה שפּעטער.מערב בלאָטינג איז געניצט צו מעסטן די ויסדרוק לעוועלס פון די כסימע קאַספּאַסע-1 פּ20 ינפלאַמאַסאָמע פּראָטעין.די PBS-בלויז באַהאַנדלונג גרופּע (שטעג C) און די pcDNA3.1 (+) מאָנאָטהעראַפּי גרופּע (pcDNA3.1 שטעג) זענען געניצט ווי אַ נעגאַטיוו קאָנטראָל, און די GEV באַהאַנדלונג גרופּע איז געניצט ווי אַ positive קאָנטראָל.די רעקאָמבינאַנט פּראָטעין אויסדרוק איז באשטעטיקט דורך דיטעקטינג אַ היסטידינע קוויטל אין יעדער פּראָטעין, און די דערוואַרט פּראָטעין באַנדס זענען אַלף-2 גיאַרדינע (38.2 kDa) און אַלף-7.3 גיאַרדינע (37.2 kDa).GEV, Giardia duodenum עקסטראַסעללולאַר וועסיקלעס, pcDNA3.1 (+), EcoRV-לינעאַרייזד וועקטאָר, SUP, סופּערנאַטאַנט
צו באַשליסן צי אַלף-2 גיאַרדינע און אַלף-7.3 גיאַרדינע ינדוסירן פּ20 קאַספּאַסע-1 אויסדרוק און שפּילן אַ ראָלע אין אַקטאַווייטינג דער באַלעבאָס NLRP3 ינפלאַמאַטאָרי ענטפער, pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine און pcDNA3.1(+)-alpha -7.3 גיאַרדין איז טראַנספעקטעד אין ערשטיק מויז פּעריטאָנעאַל מאַקראָפאַגעס מיט רעקאָמבינאַנט פּלאַזמיד דנאַ, און לעוועלס פון אויסדרוק, לאָוקאַלאַזיישאַן און אָליגאָמעריזאַטיאָן פון די שליסל ינפלאַמאַטאָרי פּראָטעינס NLRP3 זענען באשלאסן.אין דעם עקספּערימענט, GEV איז געניצט ווי די positive קאָנטראָל גרופּע, און די קיין באַהאַנדלונג גרופּע (בלויז PBS) אָדער די פּקדנאַ 3.1 (+) טראַנספעקשאַן באַהאַנדלונג גרופּע איז געווען די נעגאַטיוו גרופּע.די רעזולטאַטן האָבן געוויזן אַז, ווי אין די GEV גרופּע, רעקאָמבינאַנט פּלאַזמיד דנאַ פון giardin pcDNA3.1 (+)-alpha-2 און giardin pcDNA3.1 (+)-alpha-7.3 ריזאַלטיד אין אַפּרעגולאַטיאָן פון NLRP3, פּראָ-IL-1β און אַקטאַוויישאַן פון פּראָקאַספּאַסע-1 און קאַספּאַסע-1 (פיגורע 2אַ).אין אַדישאַן, ביידע גיאַרדינז ינדוסט באַטייַטיק יל-1β ויסשיידונג (פּקדנאַ3.1: אַנאָוואַ, עף (4, 10) = 1.625, פּ = 0.1000; אַלף-2 גיאַרדינע: אַנאָוואַ, עף (4, 10) = 1.625, פּ = 0.0007 ).;אַלף-7.3 גיאַרדינע: אַנאָוואַ, עף (4, 10) = 1.625, פּ <0.0001;GEV: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.0047) (פיגורע 2ב).רובֿ ASC פּראָטעינס זענען מאָנאָמעריק אין די ניט-באַהאַנדלונג גרופּע אָדער אין די באַהאַנדלונג גרופּע טראַנספעקטעד מיט די פּקדנאַ3.1 (+) פּלאַזמיד, אין קאַנטראַסט צו pcDNA3.1 (+) -אַלף -2 אָדער פּקדנאַ3.1 (+) -אַלף - 7.3 גיאַרדינע.ASC אָליגאָמעריזאַטיאָן איז פארגעקומען אין די רעקאָמבינאַנט פּלאַזמיד דנאַ פון די GEV positive קאָנטראָל גרופּע אָדער גרופּע, ווייזונג אַן אָליגאָמעריק פאָרעם (פיגורע 2c).די פּרילימאַנערי דאַטן פֿאָרשלאָגן אַז אַלף-2 גיאַרדינע און אַלף-7,3 גיאַרדינע קענען ינדוסירן NLRP3 אָנצינדונג אַקטאַוויישאַן.סאַבסאַקוואַנט יממונאָפלורעסענט שטודיום פון די לאָוקאַלאַזיישאַן פון ASC און NLRP3 געוויזן אַז אין די נעגאַטיוו קאָנטראָל גרופּע, די ASC פּראָטעין איז געווען צעוואָרפן איבער די סיטאָפּלאַסם און ארויס ווי אַ פּונקט סיגנאַל אויף סטימיאַליישאַן פון pcDNA3.1 (+) -אַלף -2 מיט גיאַרדינע אָדער פּקדנאַ3.1(+)-אַלף-7,3 גיאַרדינע גרופּע אָדער GEV positive קאָנטראָל גרופּע (פיגורע 2ד).אין די נעגאַטיוו קאָנטראָל און פּלאַזמיד-באהאנדלט פּקדנאַ 3.1 גרופּעס, די NLRP3 פּראָטעין סיגנאַל איז נישט דיטעקטאַד, בשעת אַ פלורעסאַנט סיגנאַל פּונקט אין ענטפער צו pcDNA3.1 (+) -אַלף -2 גיאַרדינע אָדער פּקדנאַ3.1 (+) -אַלף -7.3 איז דיטעקטאַד..גיאַרדינע זענען געפונען אין די סיטאָפּלאַסם אָדער אויף סטימיאַליישאַן פון די העוו (Fig. 2e).די דאַטן ווייַטער באַווייַזן אַז G. duodenalis giardin alpha-2 און giardin alpha-7.3 אַקטאַווייט די NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע אין מויז ערשטיק פּעריטאָנעאַל מאַקראָפאַגעס.
pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin און pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin אַקטאַווייט די NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע אין מויז פּעריטאָנעאַל מאַקראָפאַגעס.טראַנספעקטירן די רעקאָמבינאַנט עוקאַריאָטיק אויסדרוק פּלאַסמיידז pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin און pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin אין ערשטיק מיורינע פּעריטאָנעאַל מאַקראָפאַגעס און סעלז, אָדער שניט די סופּערנאַטאַנט ין 24 שעה פֿאַר אַנאַליסיס פון אויסדרוק, אָליגאָמעריזאַטיאָן. , ויסשיידונג.און לאָוקאַלאַזיישאַן פון שליסל ינפלאַמאַטאָרי פּראָטעינס.די PBS-בלויז (C) גרופּע און די pcDNA3.1 (+) איין באַהאַנדלונג גרופּע זענען געניצט ווי די נעגאַטיוו קאָנטראָל, און די GEV באַהאַנדלונג גרופּע איז געניצט ווי די positive גרופּע.אַ שליסל ינפלאַמאַטאָרי פּראָטעינס NLRP3, אַרייַנגערעכנט NLRP3, פּראָ-IL-1β, פּראָ-קאַספּאַסע-1 און פּ20 קאַספּאַסע-1, זענען דיטעקטאַד דורך מערב בלאָטינג.ב די לעוועלס פון ויסשיידונג פון IL-1β אין די סופּערנאַטאַנץ זענען באשלאסן מיט ענזיים-לינגקט ימיונאָסאָרבענט אַסייַ (ELISA).דיפעראַנסיז צווישן קאָנטראָל און יקספּערמענאַל גרופּעס זענען אַנאַלייזד דורך איין-וועג אַנאַליסיס פון וועריאַנס (ANOVA) ניצן SPSS ווייכווארג ווערסיע 22.0.אַסטעריסקס אָנווייַזן באַטייַטיק דיפעראַנסיז צווישן גרופּעס **P<0.01 און ***P<0.001.c ASC אָליגאָמעריזיישאַן לעוועלס אין פּעלאַץ זענען באשלאסן דורך DSS קרייַז-לינקינג אַנאַליסיס, בשעת ASC לעוועלס אין צעל ליסאַטעס זענען געניצט ווי אַ לאָודינג קאָנטראָל.ד וויסואַליזאַטיאָן פון יסק לאָוקאַלאַזיישאַן ניצן ימיונאָפלואָרעססענסע.e יממונאָפלורעסענסע איז געניצט צו וויזשוואַלייז די לאָוקאַלאַזיישאַן פון NLRP3.אַסק, אַפּאָפּטאָטיק ספּעק-ווי פּראָטעין;IL, ינטערלעוקין;NLRP3, נוקלעאָטידע-ביינדינג אָליגאָמעריזאַטיאָן-ווי רעסעפּטאָר 3;ns, ניט באַטייַטיק (P> 0.05)
ביידע G. duodenalis און די GEVs עס סעקרעץ אַקטאַווייט די NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע און רעגולירן באַלעבאָס ינפלאַמאַטאָרי רעספּאָנסעס אין וויטראָ.אזוי, די ראָלע פון ​​די NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע אין די פּאַטאַדזשעניקאַטי פון G. duodenalis בלייבט ומקלאָר.צו פאָרשן דעם אַרויסגעבן, מיר דיזיינד אַן עקספּערימענט צווישן מיסע ינפעקטאַד מיט G. duodenalis סיסט און מיסע ינפעקטאַד מיט G. duodenalis סיסט + MCC950 ינכיבאַטער באַהאַנדלונג און קאַמפּערד NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע אויסדרוק ווען ינפעקטאַד מיט G. duodenalis סיסט.א דיטיילד סכעמע פון ​​דער עקספּערימענט איז געוויזן אין Fig. 3 אַ.ענדערונגען אין גוף וואָג פון מיסע אין פאַרשידענע באַהאַנדלונג גרופּעס זענען מאָניטאָרעד פֿאַר 7 טעג נאָך ינפעקציע מיט סיס, און די רעזולטאַטן זענען געוויזן אין Fig. 3b.קאַמפּערד צו די גרופּע באהאנדלט מיט ריין פּבס, די רעזולטאַטן געוויזן אַז (איך) די גוף וואָג פון מיסע ינפעקטאַד מיט G. duodenalis סיסט דיקריסט פון טאָג 3 צו טאָג 7 נאָך ינפעקציע;(ii) באַהאַנדלונג מיט די MCC950 ינכיבאַטער האט קיין באַטייטיק ווירקונג אויף די גוף וואָג פון די מיסע..קאַמפּערד צו די איין ינפעקציע גרופּע, די BW פון די דואַדאַנאַל ינפעקציע גרופּע באהאנדלט מיט MCC950 דיקריסט צו וועריינג דיגריז (טאָג 1: ANOVA, F(3, 24) = 1.885, P = 0.0148; טאָג 2: ANOVA, F(3, 24) ) = 0.4602, P<0.0001 טאָג 3: ANOVA, F(3, 24) = 0.8360, P = 0.0010: ANOVA, F(3, 24) = 1.683, P = 0.0052; (3, 24)=0.6497, פּ=0.0645; טאָג 6: ANOVA, F(3, 24)=5.457, P=0.0175: ANOVA, F(3, 24) = 2.893, P = 0.0202).די דאַטן באַווייַזן אַז די NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע פּראַטעקץ מיסע פון ​​באַטייטיק וואָג אָנווער אין די פרי סטאַגעס (2-4 טעג) פון דואַדאַנאַל ינפעקציע.מיר דעמאָלט אַימעד צו דעטעקט G. duodenalis טראָפאָזאָיטעס אין דואַדאַנאַל לאַוואַגע פליסיק און די רעזולטאַטן זענען געוויזן אין פיגורע 3 ק.קאַמפּערד צו די G. duodenalis סיסט ינפעקציע גרופּע, די נומער פון טראָפאָזאָיטעס אין די דואַדענום באטייטיק געוואקסן נאָך בלאַקינג די נלרפּ3 ינפלאַמאַסאָמע (ה (12) = 2.902, פּ = 0.0133).דואַדאַנאַל געוועבן סטיינד מיט HE געוויזן, קאַמפּערד מיט נעגאַטיוו קאָנטראָל באהאנדלט מיט PBS און MCC950 אַליין: (איך) G. duodenalis סיסט ינפעקציע ריזאַלטיד אין שעדיקן צו די דואַדאַנאַל ווילי (ANOVA, F (3, 24) = 0.4903, P = 0.0488 ) און קריפּט אַטראָפי (אַנאָוואַ, F (3, 24) = 0.4716, פּ = 0.0089);(ii) דואַדאַנאַם פון מיסע ינפעקטאַד מיט G. duodenalis סיסט און באהאנדלט מיט MCC950 ינכיבאַטערז.דואַדאַנאַל ווילי זענען דאַמידזשד און טויט (אַנאָוואַ, עף (3, 24) = 0.4903, פּ = 0.0144) מיט אַטראָפי און קריפּט בראַנטשינג (אַנאָוואַ, עף (3, 24) = 0.4716, פּ = 0, 0481) (פיגורע 3 ד- ו) .די רעזולטאטן פֿאָרשלאָגן אַז די NLRP3 ינפלאַמאַסאָמע פיעסעס אַ ראָלע אין רידוסינג די פּאַטאַדזשעניקאַטי פון G. duodenalis.
די ראָלע פון ​​​​NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע אין Giardia דואַדאַנאַם ינפעקציע.מיסע זענען גאַוואַדזשד (יוו) מיט דואַדענאָקאָקקאַל סיס און דערנאָך באהאנדלט מיט אָדער אָן MCC950 (יפּ).איין באַהאַנדלונג גרופּעס מיט PBS אָדער MCC950 זענען געניצט ווי קאָנטראָלס.עקספּערימענטאַל גרופּע און באַהאַנדלונג רעזשים.ב די גוף וואָג פון מיסע אין יעדער פון די פאַרשידן באַהאַנדלונג גרופּעס איז מאָניטאָרעד פֿאַר 7 טעג.די חילוק צווישן די G. duodenalis ינפעקציע גרופּע און די G. duodenalis + MCC950 ינפעקציע באַהאַנדלונג גרופּע איז אַנאַלייזד דורך ה-פּרובירן ניצן SPSS ווייכווארג ווערסיע 22.0.אַסטעריסקס אָנווייַזן באַטייַטיק דיפעראַנסיז ביי *P<0.05, **P<0.01, אָדער ***P<0.001.c פּאַראַסיטיק מאַסע איז באשלאסן דורך קאַונטינג די נומער פון טראָפאָזאָיטעס אין דואַדאַנאַל לאַוואַגע פליסיק.די חילוק צווישן די G. duodenalis ינפעקציע גרופּע און די G. duodenalis + MCC950 ינפעקציע באַהאַנדלונג גרופּע איז אַנאַלייזד דורך ה-פּרובירן ניצן SPSS ווייכווארג ווערסיע 22.0.אַסטעריסקס אָנווייַזן באַטייַטיק דיפעראַנסיז ביי * P <0.05.ד העמאַטאָקסילין און עאָסין (ה & E) סטיינינג רעזולטאַטן פון דואַדאַנאַל כיסטאָפּאַטאַלאַדזשי.רויט אַראָוז אָנווייַזן שעדיקן צו די ווילי, גרין אַראָוז אָנווייַזן שעדיקן צו די קריפּץ.וואָג באַר: 100 μם.E, F סטאַטיסטיש אַנאַליסיס פון דואַדאַנאַל ווילוס הייך און מויז קריפּט הייך.אַסטעריסקס אָנווייַזן באַטייַטיק דיפעראַנסיז ביי * P <0.05 און ** P <0.01.די רעזולטאַטן זענען גענומען פון 7 פרייַ בייאַלאַדזשיקאַל יקספּעראַמאַנץ.BW, גוף וואָג;יג, ינטראַגאַסטריק עקספּרעס מאַרשרוט;יפּ, ינטראַפּעריטאָנעאַל עקספּרעס מאַרשרוט;ns, ניט באַטייַטיק (פּ> 0.05);פּבס, פאָספאַטע באַפערד סאַלין;WT, ווילד טיפּ
די ויסשיידונג פון IL-1β איז אַ כאַלמאַרק פון אָנצינדונג אַקטאַוויישאַן.צו באַשליסן צי G. duodenalis alpha-2 giardine און alpha-7.3 giardine אַקטאַווייט די NLRP3 באַלעבאָס ינפלאַמאַסאָמע אין וויוואָו, מיר געוויינט אַנטריטיד ווט מיסע (שאַם גרופּע) און NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע-בלאַקט מיסע (MCC950 ינכיבאַטיד באַהאַנדלונג גרופּע).א דיטיילד סכעמע פון ​​דער עקספּערימענט איז געוויזן אין פיגורע 4 אַ.עקספּערימענטאַל גרופּעס קאָנסיסטעד פון מיסע באהאנדלט מיט PBS, G. Duodenalis סיסט באַהאַנדלונג דורך גאַוואַגע, ינטראַמוסקולאַר ינדזשעקשאַן פון פּקדנאַ3.1, און ינטראַמוסקולאַר ינדזשעקשאַן פון פּקדנאַ3.1 (+)-אַלף-2 גיאַרדינע אָדער פּקדנאַ3.1-אַלף-7.3 גיאַרדינע.אויף די 7 טאָג נאָך ינטראַמוסקולאַר אַדמיניסטראַציע פון ​​די רעקאָמבינאַנט פּלאַזמיד, סערום איז געזאמלט און די מדרגה פון IL-1β אין יעדער גרופּע איז באשלאסן.ווי געוויזן אין פיגורע 4ב, אין די MCK גרופּע: (איך) קאַמפּערד מיט די PBS גרופּע, pcDNA3.1 באַהאַנדלונג האט קיין באַטייטיק ווירקונג אויף IL-1β ויסשיידונג (ANOVA, F (4.29) = 4.062, P = 0.9998), אָבער, יל-β ויסשיידונג איז באטייטיק עלעוואַטעד אין די דזשי דואַדאַנאַליס סיסט גרופּע (ANOVA, F (4, 29) = 4.062, פּ = 0.0002), (ii) pcDNA3.1-alpha-2 giardine און pcDNA3.1- ינטראַמוסקולאַר ינדזשעקשאַן פון אַלף-7.3 גיאַרדינע באטייטיק געוואקסן סערום יל-1β לעוועלס (אַנאָוואַ, F (4, 29) = 4.062, פּ <0.0001);(iii) pcDNA3.1-alpha-7,3 giardine ינדוסט הויך לעוועלס פון IL -1β ויסשיידונג אין די pcDNA3.1-alpha-2 giardine ינטראַמוסקולאַר ינדזשעקשאַן גרופּע (ANOVA, F (4, 29) = 4.062, P = 0.0333) .קאַמפּערד מיט יעדער גרופּע אין די MCC950 באַהאַנדלונג גרופּע און די MOCK גרופּע: (איך) IL-1β ויסשיידונג לעוועלס אין די PBS קאָנטראָל גרופּע און די pcDNA3.1 קאָנטראָל גרופּע דיקריסט צו אַ זיכער מאָס נאָך בלאַקינג די MCC950 ינכיבאַטער, אָבער דער חילוק איז נישט געווען באַטייַטיק (PBS: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.4912 pcDNA3.1: ANOVA, F(9, 58) = 3.540, P = 0.5949);(ii) נאָך בלאַקינג MCC950., IL-1β ויסשיידונג איז באטייטיק רידוסט אין די G. duodenalis סיסט-ינפעקטאַד גרופּע, די pcDNA3.1-alpha-2 giardine גרופּע, און די pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine גרופּע (G. duodenalis: ANOVA, F(9) , 58) = 3.540, P = 0.0120; pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(9, 58) = 3.540, P = 0.0447 pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(9; ) = 3.540, פּ = 0.0164).די רעזולטאַטן פֿאָרשלאָגן אַז אַלף-2 גיאַרדינע און אַלף-7.3 גיאַרדינע פאַרמיטלען די אַקטאַוויישאַן פון די NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע אין וויוואָו.
pcDNA3.1 (+) -גיאַרדינעס אַקטאַווייט די NLRP3 באַלעבאָס ינפלאַממאַסאָמע אין וויוואָו.מיסע זענען ימיונייזד (ימ) מיט רעקאָמבינאַנט עוקאַריאָטיק אויסדרוק פּלאַזמיד פּקדנאַ3.1 (+) -אַלף -2 גיאַרדינע אָדער פּקדנאַ3.1 (+) -אַלף -7.3 גיאַרדינע און דערנאָך באהאנדלט מיט MCC950 (יפּ; MCC950 גרופּע) אָדער נישט (באָק גרופּע) ).די PBS אָדער pcDNA3.1 (+) פּלאַזמיד באַהאַנדלונג גרופּע איז געניצט ווי אַ נעגאַטיוו קאָנטראָל, די G. duodenalis סיסט באַהאַנדלונג גרופּע איז געניצט ווי אַ positive קאָנטראָל.עקספּערימענטאַל גרופּע און באַהאַנדלונג רעזשים.ב סערום לעוועלס פון IL-1β אין מיסע זענען געמאסטן אויף טאָג 7 דורך עליסאַ אַסייַ.דיפעראַנסיז צווישן גרופּעס אין די MOCK גרופּע זענען אַנאַלייזד מיט איין-וועג ANOVA, און דיפעראַנסיז צווישן די MOCK גרופּע און די MCC950 גרופּע זענען אַנאַלייזד מיט די ה-פּרובירן פון SPSS ווייכווארג ווערסיע 22.0.אַסטעריסקס אָנווייַזן באַטייַטיק דיפעראַנסיז צווישן באַהאַנדלונג גרופּעס אין די MCK גרופּע, *P<0.05 און ***P<0.001;דאָללאַר וואונדער ($) אָנווייַזן באַטייַטיק דיפעראַנסיז צווישן יעדער גרופּע אין די MOCK גרופּע און די MCC950 גרופּע ביי פּ <0.05.רעזולטאַטן פון זיבן פרייַ בייאַלאַדזשיקאַל יקספּעראַמאַנץ.איך, ינטראַמוסקולאַר ינדזשעקשאַן, ns, ניט באַטייַטיק (פּ> 0.05)
צו פאָרשן די ווירקונג פון אַלף-2 און אַלף-קסנומקס גיאַרדינע-מעדיאַטעד אַקטאַוויישאַן פון די NLRP3 באַלעבאָס ינפלאַממאַסאָמע אויף G. duodenalis ינפעקטיוויטי, מיר געוויינט WT C57BL/6 מיסע און ינדזשעקטיד אַלף-2 גיאַרדינע און אַלף-7.3 גיאַרדינע.די פּלאַסמיד איז ינדזשעקטיד ינטראַמוסקולאַרלי, נאָך 3 טעג דורך די גאַסטריק רער פון די דזשי דואַדאַנאַליס סיסט, נאָך וואָס די מיסע זענען באמערקט פֿאַר 7 טעג.א דיטיילד סכעמע פון ​​דער עקספּערימענט איז געוויזן אין Fig. 5 אַ.די גוף וואָג פון יעדער מויז איז געמאסטן יעדער טאָג, סאַמפּאַלז פון פריש דואַדינאַל געוועב זענען געזאמלט אויף די 7 טאָג נאָך אַדמיניסטראַציע דורך אַ גאַסטריק רער, די נומער פון טראָפאָזאָיטעס איז געמאסטן און היסטאָפּאַטהאָלאָגיקאַל ענדערונגען זענען באמערקט.ווי געוויזן אין פיגורע 5ב, מיט ינקריסינג פידינג צייט, די BW פון מיסע אין יעדער גרופּע ביסלעכווייַז געוואקסן.די מט פון מיסע אנגעהויבן צו פאַרמינערן אויף די 3 טאָג נאָך ינטראַגאַסטרי אַדמיניסטראַציע פון ​​דזשי דואַדאַנאַליס סיסט, און דעמאָלט ביסלעכווייַז געוואקסן.אַקטאַוויישאַן פון די NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע ינדוסט דורך ינטראַמוסקולאַר ינדזשעקשאַן פון אַלף-2 גיאַרדינע און אַלפאַ 7.3 גיאַרדינע באטייטיק אַטטענואַטעד וואָג אָנווער אין מיסע (טאָג 1: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 1.399, P = 0 .9754 טאָג 1: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30)=1.399, P=0.9987 טאָג 2: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172, פּ = 0.9979; טאָג 2: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172, P = 0.8409; 4, 30) = 0.8222, פּ = 0.0262 טאָג 3: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.8222, P = 0.0083 Day 4: pcDNA3.1-alpha-2 giard , F(4, 30) = 0.5620, פּ = 0.0012, טאָג 4: פּקדנאַ3.1-אַלף-7.3 גיאַרדינע, אַנאָוואַ, עף (4, 30) = 0.5620, פּ <0.0001, טאָג 5: פּקדנאַ3.1-אַלף - 2 גיאַרדינע, אַנאָוואַ, עף (4, 30) = 0.9728, פּ <0.0001 טאָג 5: פּקדנאַ3.1-אַלף -7.3 גיאַרדינע, אַנאָוואַ, עף (4, 30) = 0.9728, פּ <0.0001 טאָג 6: פּקדנאַ3. אַלף-2 גיאַרדינע, אַנאָוואַ, עף (4, 30) = 0.7154, פּ = 0.0012, טאָג 6: פּקדנאַ3.1-אַלף-7.3 גיאַרדינע, אַנאָוואַ, עף (4, 30) = 0.7154, פּ = 0.0006;טאָג 7: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, P<0.0001 טאָג 7: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, P <0.0001).די פּעראַסיטיק מאַסע איז אַססעססעד אין די דואַדאַנאַם (Fig. 5c).קאַמפּערד מיט די אַנטריטיד positive קאָנטראָל און די גרופּע ינדזשעקטיד מיט די ליידיק פּקדנאַ3.1 וועקטאָר, די נומער פון ג. דואָדענאַליס טראָפאָזאָיטעס איז באטייטיק רידוסט אין די גרופּעס ינדזשעקטיד מיט α-2 גיאַרדינע און α-7,3 גיאַרדינע (pcDNA3.1-alpha) -2 גיאַרדינע: אַנאָוואַ, עף (3, 24) = 1.209, פּ = 0.0002, פּקדנאַ3.1-אַלף-7.3 גיאַרדינע: אַנאָוואַ, עף (3, 24) = 1.209, פּ <0.0001).אין דערצו, גיאַרדינע אַלפאַ-7.3 איז געווען מער פּראַטעקטיוו אין מיסע ווי גיאַרדינע אַלפאַ-2 (אַנאָוואַ, F (3, 24) = 1.209, פּ = 0.0081).די רעזולטאַטן פון HE סטיינינג זענען געוויזן אין Fig.5ד–פ.מיסע ינדזשעקטיד מיט אַלף-2 גיאַרדינע און אַלף-7.3 גיאַרדינע האָבן ווייניקערע דואַדינאַל געוועב ליזשאַנז, ארויסגעוויזן דורך ווילוס שעדיקן, קאַמפּערד מיט מיסע ינדזשעקטיד מיט G. duodenalis און מיסע ינדזשעקטיד מיט G. duodenalis אין קאָמבינאַציע מיט אַ ליידיק פּקדנאַ3 וועקטאָר .1 פארגרעסער.(pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, P = 0.0035 אָדער P = 0.0068; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3,24) = 2.466, P = 0.0028 אָדער פּ = 0.0055) און רידוסט קריפּט אַטראָפי (פּקדנאַ3.1-אַלף-2 גיאַרדינע: אַנאָוואַ, עף (3, 24) = 1.470, פּ = 0.0264 אָדער פּ = 0.0158; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANO giardine , F (3, 24) = 1.470, פּ = 0.0371 אָדער פּ = 0.0191).די רעזולטאטן פֿאָרשלאָגן אַז אַלף-2 גיאַרדינע און אַלף-7,3 גיאַרדינע רעדוצירן די ינפעקטיוויטי פון G. duodenalis דורך אַקטאַווייטינג די NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע אין וויוואָו.
ראָלע פון ​​פּקדנאַ3.1 (+)-גיאַרדינס אין G. duodenalis ינפעקציע.מיסע זענען ימיונייזד (ים) מיט רעקאָמבינאַנט עוקאַריאָטיק אויסדרוק פּלאַסמיידז pcDNA3.1 (+) -אַלף -2 גיאַרדינע אָדער פּקדנאַ3.1 (+) -אַלף -7.3 גיאַרדינע און דעמאָלט טשאַלאַדזשד מיט G. duodenalis סיס (יג).די PBS גרופּע און די pcDNA3.1 (+) + דואַדאַנאַל סיסט באַהאַנדלונג גרופּע זענען געניצט ווי נעגאַטיוו קאָנטראָל גרופּעס, און די דואַדאַנאַל סיסט באַהאַנדלונג גרופּע איז געניצט ווי positive קאָנטראָל גרופּע.עקספּערימענטאַל גרופּע און באַהאַנדלונג רעזשים.ב די MT פון מיסע אין יעדער פון די פאַרשידן באַהאַנדלונג גרופּעס איז מאָניטאָרעד פֿאַר 7 טעג נאָך אַרויסרופן.אַסטעריסקס אָנווייַזן באַטייַטיק דיפעראַנסיז צווישן גרופּעס אין די G. duodenalis גרופּע און די pcDNA3.1 (+) -אַלף -2 גיאַרדינע גרופּע, * P <0.05, **P <0.01, און ***P <0.001;דער דאָללאַר צייכן ($) ינדיקייץ אַ באַטייטיק חילוק צווישן יעדער גרופּע פון ​​G. duodenalis און די pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 דזשאַרדינע גרופּע, $$P<0.01 און $$$P<0.001.C פּאַראַסיטיק מאַסע איז באשלאסן דורך קאַונטינג די נומער פון טראָפאָזאָיטעס אין 1 מל פון דואַדאַנאַל לאַוואַגע פון ​​די דואַדאַנאַם (3 סענטימעטער לאַנג) און אויסגעדריקט ווי די נומער פון פּעראַסייץ פּער סענטימעטער פון דואַדאַנאַם.דיפעראַנסיז צווישן די G. duodenalis ינפעקציע גרופּע, די pcDNA3.1 (+) -אַלף -2 גיאַרדינע גרופּע, און די פּקדנאַ3.1 (+) -אַלף -7.3 גיאַרדינע גרופּע זענען אַנאַלייזד דורך איין-וועג ANOVA ניצן SPSS ווייכווארג ווערסיע 22.0.אַסטעריסקס אָנווייַזן באַטייַטיק דיפעראַנסיז ביי **P<0.01 און ***P<0.001.ד היסטאָפּאַטהאָלאָגיקאַל ענדערונגען אין די דואַדאַנאַם.רויט אַראָוז אָנווייַזן שעדיקן צו די ווילי, גרין אַראָוז אָנווייַזן שעדיקן צו די קריפּץ.וואָג באַר: 100 μם.E, F סטאַטיסטיש אַנאַליסיס פון מויז דואַדאַנאַל ווילוס הייך (E) און קריפּט הייך (F).דיפעראַנסיז צווישן גרופּעס אין פיגורע 1 ד זענען אַנאַלייזד דורך איין-וועג ANOVA ניצן SPSS ווייכווארג ווערסיע 22.0.אַסטעריסקס אָנווייַזן באַטייַטיק דיפעראַנסיז ביי * P <0.05 און ** P <0.01.רעזולטאַטן פון זיבן פרייַ בייאַלאַדזשיקאַל יקספּעראַמאַנץ.ns, ניט באַטייַטיק (P> 0.05)
Giardia duodenum איז אַ באַוווסט ינטעסטאַנאַל פּעראַסייט פון יומאַנז און אנדערע מאַמאַלז וואָס ז גיאַרדיאַסיס.אין 2004, עס איז געווען אַרייַנגערעכנט אין די WHO נעגלעקטעד דיסעאַסעס יניטיאַטיווע רעכט צו זיין הויך פּרעוואַלאַנס איבער 6 יאָר, ספּעציעל אין קהילות פון נידעריק סאָסיאָעקאָנאָמיק סטאַטוס [32].די ינייט ימיון סיסטעם פיעסעס אַ קריטיש ראָלע אין די ימיון ענטפער צו G. duodenalis ינפעקציע.מויז מאַקראָפאַגעס האָבן שוין רעפּאָרטעד צו ינגאַלף און טייטן G. duodenalis דורך ריליסינג עקסטראַסעללולאַר טראַפּס [33].אונדזער פריערדיקן שטודיום האָבן געוויזן אַז G. duodenalis, אַ ניט-ינווייסיוו עקסטראַסעללולאַר פּעראַסייט, אַקטאַווייץ פּ38 MAPK, ERK, NF-κB p65, און NLRP3 ינפלאַמאַטאָרי סיגנאַלינג פּאַטווייז אין מויז מאַקראָפאַגעס צו רעגולירן באַלעבאָס ינפלאַמאַטאָרי רעספּאָנסעס, און פריי GEV קען פאַרבעסערן דעם פּראָצעס.13], 24 ].אָבער, די פּינטלעך PAMPs ינוואַלווד אין NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע-רעגיאַלייטאַד אָנצינדונג אין GEV און די ראָלע פון ​​​​NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע אין גיאַרדיאַסיס זענען נאָך צו זיין ילוסידאַד.צו אָפּדאַך ליכט אויף די צוויי פראגעס, מיר געפירט דעם לערנען.
די NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע איז ליגן אין די סיטאָפּלאַסם פון ימיון סעלז און קענען זיין אַקטיווייטיד דורך פאַרשידן פּאַרטיקאַלז אַזאַ ווי יעריק זויער קריסטאַלז, טאַקסאַנז, באַקטיריאַ, ווירוסעס און פּעראַסייץ.אין באַקטיריאַל שטודיום, טאַקסאַנז האָבן שוין יידענאַפייד ווי שליסל פּאַמפּס וואָס אַקטאַווייט ינפלאַמאַטאָרי סענסאָרס, לידינג צו אָנצינדונג און צעל טויט [34].עטלעכע סטראַקטשעראַלי דייווערס טאַקסאַנז, אַזאַ ווי העמאָליסין פֿון סטאַפילאָקאָקקוס אַורעוס [35] און Escherichia coli [36], העמאָליסין BL (HBL) פֿון ענטעראָטאָקסין (נהע) [37], ינדוסירן די אַקטאַוויישאַן פון NLRP3 אָנצינדונג.וויראַל שטודיום האָבן געוויזן אַז ווירולענסע פּראָטעינס אַזאַ ווי סאַרס-COV-2 קאָנווערט (E) פּראָטעין [38] און זיקאַ ווירוס NS5 פּראָטעין [39] זענען וויכטיק PAMPs אנערקענט דורך די NLRP3 רעסעפּטאָר.אין פּעראַסייט שטודיום, פילע פּעראַסייץ זענען רעפּאָרטעד צו זיין פֿאַרבונדן מיט אָנצינדונג אַקטאַוויישאַן פון די באַלעבאָס, אַזאַ ווי טאָקסאָפּלאַסמאַ גאָנדיי, Trichomonas vaginalis [40], Trypanosoma cruzi [41], און Leishmania [42].די געדיכט גראַניאַל פּראָטעינס GRA35, GRA42 און GRA43, פֿאַרבונדן מיט די ווירולענסע פון ​​טאָקסאָפּלאַסמאַ גאָנדיי, זענען פארלאנגט פֿאַר די ינדאַקשאַן פון פּיראָפּטאָסיס אין לויס שטשור מאַקראָפאַגעס [43].אין אַדישאַן, עטלעכע לעישמאַניאַ שטודיום האָבן פאָוקיסט אויף יחיד מאַלאַקיולז ינוואַלווד אין די NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע, אַזאַ ווי פּעראַסייט מעמבראַנע ליפּאָפאָספאָגליקאַן [44] אָדער צינק מעטאַללאָפּראָטעאַסע [45].צווישן די אַנעקסין-ווי אַלף-גיאַרדין משפּחה פון גענעס, אַלף-1 גיאַרדין איז געוויזן צו זיין אַ פּאָטענציעל וואַקצין קאַנדידאַט פּראַוויידינג שוץ קעגן G. duodenalis אין אַ מויז מאָדעל [18].אין אונדזער לערנען, מיר אויסגעקליבן G. duodenalis ווירולענסע סיבות אַלף-2 און אַלף-7,3 גיאַרדינעס, וואָס זענען יינציק צו גיאַרדיאַ אָבער לעפיערעך ווייניקער רעפּאָרטעד.די צוויי ציל גענעס זענען קלאָונד אין די pcDNA3.1 (+) עוקאַריאָטיק אויסדרוק סיסטעם וועקטאָר פֿאַר אַנאַליסיס פון אָנצינדונג אַקטאַוויישאַן.
אין אונדזער מויז מאָדעל, קלעאַוועד קאַספּאַסע פראַגמאַנץ דינען ווי מאַרקערס פון ינפלאַמאַטאָרי אַקטאַוויישאַן.ביי סטימיאַליישאַן, NLRP3 ינטעראַקץ מיט ASC, ריקרוץ פּראָקאַספּאַסעס און דזשענערייץ אַקטיוו קאַספּאַסעס וואָס קלעאַווירן פּראָ-IL-1β און פּראָ-IL-18 אין דערוואַקסן IL-1β און IL-18, ריספּעקטיוולי -18.ינפלאַמאַטאָרי קאַספּאַסעס (קאַספּאַסעס-1, -4, -5 און -11) זענען אַ קאַנסערווד משפּחה פון סיסטינע פּראָטעאַסעס וואָס זענען קריטיש פֿאַר ינייט פאַרטיידיקונג און זענען ינוואַלווד אין אָנצינדונג און פּראָוגראַמד צעל טויט [46].קאַספּאַסע-1 איז אַקטיווייטיד דורך קאַנאַנאַקאַל ינפלאַממאַסאָמעס [47], בשעת קאַספּאַסעס-4, -5, און -11 זענען קלעאַוועד בעשאַס די פאָרמירונג פון ייטיפּיקאַל ינפלאַממאַסאָמעס [48].אין דעם לערנען, מיר געוויינט מויז פּעריטאָנעאַל מאַקראָפאַגעס ווי אַ מאָדעל און ינוועסטאַגייטאַד פּ20 קאַספּאַסע-1 קלעאַוועד קאַספּאַסע-1 ווי אַ מאַרקער פון באַלעבאָס NLRP3 אָנצינדונג אַקטאַוויישאַן אין שטודיום פון G. duodenalis ינפעקציע.די רעזולטאַטן האָבן געוויזן אַז פילע אַלף-גיאַרדינס זענען פאַראַנטוואָרטלעך פֿאַר די טיפּיש אַקטאַוויישאַן פון אָנצינדונג, וואָס איז קאָנסיסטענט מיט די ופדעקונג פון שליסל ווירולענסע מאַלאַקיולז ינוואַלווד אין באַקטיריאַ און ווירוסעס.אָבער, אונדזער לערנען איז בלויז אַ פּרילימאַנערי פאַרשטעלן און עס זענען אנדערע מאַלאַקיולז וואָס קענען אַקטאַווייט ניט-קלאַסיש ינפלאַממאַסאָמעס, ווי אונדזער פריערדיקן לערנען געפֿונען ביידע קלאַסיש און ניט-קלאסישע ינפלאַממאַסאָמעס אין G. duodenalis ינפעקציע [13].צו ווייַטער באַשטימען צי די דזשענערייטאַד פּ20 קאַספּאַסע-1 איז פֿאַרבונדן מיט די NLRP3 ינפלאַמאַסאָמע, מיר טראַנספעקטעד אַלף-2 און אַלף-7.3 גיאַרדינס אין מויז פּעריטאָנעאַל מאַקראָפאַגעס צו באַשטימען די שליסל מאַלאַקיול פּראָטעין אויסדרוק לעוועלס און ASC אָליגאָמעריזאַטיאָן לעוועלס, קאַנפערמינג אַז ביידע α-גיאַרדינס אַקטאַווייט ינפלאַמאַסאָמע NLRP3.אונדזער רעזולטאַטן זענען אַ ביסל אַנדערש פון די פון Manko-Prykhoda עט על., וואָס האָט געמאלדן אַז סטימיאַליישאַן פון קאַקאָ-2 סעלז מיט G. muris אָדער E. coli EPEC סטריינז אַליין קענען פאַרגרעסערן די פלואָרעססענסע ינטענסיטי פון NLRP3, ASC און Caspase-1, כאָטש ניט באטייטיק, בשעת קאָסטימיאַליישאַן פון G. Muris און E. Coli געוואקסן די לעוועלס פון דריי פּראָטעינס [49].די דיסקרעפּאַנסי קען זיין רעכט צו דיפעראַנסיז אין די סעלעקציע פון ​​​​Giardia מינים, צעל שורות און ערשטיק סעלז.מיר אויך דורכגעקאָכט אין וויוואָו אַסאַסאַז ניצן MCC950 אין 5-וואָך-אַלט ווייַבלעך WT C57BL/6 מיסע, וואָס זענען מער סאַסעפּטאַבאַל צו G. duodenalis.MCC950 איז אַ שטאַרק און סעלעקטיוו קליין מאַלאַקיול NLRP3 ינכיבאַטער וואָס בלאַקס קאַנאַנאַקאַל און ניט-קאַנאָניקאַל NLRP3 אַקטאַוויישאַן אין נאַנאָמאָלאַר קאַנסאַנטריישאַנז.MCC950 ינכיבאַץ NLRP3 אַקטאַוויישאַן אָבער קען נישט ווירקן די אַקטאַוויישאַן פון AIM2, NLRC4 און NLRP1 ינפלאַמאַטאָרי פּאַטווייז אָדער TLR סיגנאַלינג פּאַטווייז [27].MCC950 בלאַקס NLRP3 אַקטאַוויישאַן אָבער טוט נישט ינכיבאַט NLRP3 ינישיישאַן, K + efflux, Ca2+ ינפלאַקס אָדער די ינטעראַקשאַן צווישן NLRP3 און ASC;אַנשטאָט, עס ינכיבאַץ NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע אַקטאַוויישאַן דורך בלאַקינג ASC אָליגאָמעריזאַטיאָן [27].דעריבער, מיר געוויינט MCC950 אין אַן אין וויוואָו לערנען צו באַשליסן די ראָלע פון ​​​​NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע נאָך גיאַרדינע ינדזשעקשאַן.אַקטיווייטיד קאַספּאַסע-1 פּ10 קלעאַוועס פּראָ-ינפלאַמאַטאָרי סיטאָקינעס פּראָ-IL-1β און פּראָ-IL-18 אין דערוואַקסן IL-1β און IL-18 [50].אין דעם לערנען, סערום IL-1β לעוועלס אין גיאַרדינע-באהאנדלט מיסע מיט אָדער אָן MCC950 זענען געניצט ווי אַ גראדן פון צי די NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע איז אַקטיווייטיד.ווי דערוואַרט, MCC950 באַהאַנדלונג באטייטיק רידוסט סערום IL-1β לעוועלס.די דאַטן קלאר באַווייַזן אַז G. duodenalis giardin alfa-2 און giardin alfa-7.3 זענען ביכולת צו אַקטאַווייט די NLRP3 מויז ינפלאַמאַסאָמע.
באַטייטיק דאַטן אַקיומיאַלייטיד אין די לעצטע יאָרצענדלינג האָבן דעמאַנסטרייטיד אַז IL-17A איז דער בעל רעגולאַטאָר פון ימיונאַטי קעגן G. muris, ינדוסינג IL-17RA סיגנאַלינג, פּראַדוסינג אַנטימיקראָביאַל פּעפּטיידז און רעגיאַלייטינג דערגאַנג אַקטאַוויישאַן [51].אָבער, Giardia ינפעקציע אַקערז מער אָפט אין יונגע אַדאַלץ, און עס איז געווען געמאלדן אַז Giardia ינפעקציע אין יונג מיסע אַקטאַווייץ די IL-17A ענטפער צו יגזערט זיין פּראַטעקטיוו ווירקונג [52], פּראַמפּטינג ריסערטשערז צו קוקן פֿאַר אנדערע ימיונאָמאָדולאַטאָרי Giardia.מעקאַניזאַמז פון העלמינטה ינפעקציע.די מחברים פון אַ פריש לערנען געמאלדן אַז G. muris קענען אַקטאַווייט די NLRP3 ינפלאַמאַסאָמע דורך E. coli EPEC, וואָס פּראַמאָוץ די פּראָדוקציע פון ​​אַנטימיקראָביאַל פּעפּטיידז און ראַדוסאַז זייַן אַטאַטשמאַנט קאַפּאַציטעט און די נומער פון טראַפאָזאָיטעס אין די ינטעסטאַנאַל שעטעך, דערמיט רידוסינג די שטרענגקייַט פון צווייפּינטל. חולאתן געפֿירט דורך באַסיללי [49].די NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע איז ינוואַלווד אין דער אַנטוויקלונג פון פאַרשידן חולאתן.שטודיום האָבן געוויזן אַז Pseudomonas aeruginosa טריגערז אַוטאָפאַגי אין מאַקראָפאַגעס צו ויסמיידן צעל טויט, און דעם פּראָצעס דעפּענדס אויף די אַקטאַוויישאַן פון די NLRP3 ינפלאַמאַסאָמע [53].פֿאַר N. caninum, ריאַקטיוו זויערשטאָף מינים-מעדיאַטעד אַקטאַוויישאַן פון די NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע לימיץ זייַן רעפּלאַקיישאַן אין דער באַלעבאָס, מאכן עס אַ פּאָטענציעל טעראַפּיוטיק ציל [9].Paracoccidioides brasiliensis איז געפונען צו ינדוסירן די אַקטאַוויישאַן פון די NLRP3 ינפלאַמאַסאָמע אין מויז ביין מאַרך-דערייווד דענדריטיק סעלז, ריזאַלטינג אין די מעלדונג פון די ינפלאַמאַטאָרי סיטאָקינע IL-1β, וואָס פיעסעס אַ קריטיש ראָלע אין באַלעבאָס פאַרטיידיקונג [10].עטלעכע לעישמאַניאַ מינים, אַרייַנגערעכנט L. amazonensis, L. major, L. braziliensis, און L. infantum chagasi, אַקטאַווייט NLRP3 און ASC-אָפענגיק קאַספּאַסע-1 אין מאַקראָפאַגעס, ווי געזונט ווי לעישמאַניאַ ינפעקציע.פּעראַסייט רעפּלאַקיישאַן איז ענכאַנסט אין מיסע דיפישאַנט אין די NLRP3/ASC/caspase-1 דזשין [11].Zamboni et al.לעישמאַניאַ ינפעקציע איז רעפּאָרטעד צו ינדוסירן אַקטאַוויישאַן פון די NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע אין מאַקראָפאַגעס, וואָס לימאַץ ינטראַסעללולאַר פּעראַסייט רעפּלאַקיישאַן.אַזוי, לעישמאַניאַ קען ינכיבאַט NLRP3 אַקטאַוויישאַן ווי אַ אַוווידאַנס סטראַטעגיע.אין אין וויוואָו שטודיום, די NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע קאַנטריביוטיד צו די ילימאַניישאַן פון לעישמאַניאַ, אָבער האט נישט ווירקן געוועבן [54].קאָנווערסעלי, אין העלמינטהיאַסיס שטודיום, אַקטאַוויישאַן פון די NLRP3 ינפלאַמאַסאָמע סאַפּרעסט די פּראַטעקטיוו ימיונאַטי פון די באַלעבאָס קעגן גאַסטראָוינטעסטאַנאַל העלמינטהיאַסיס [12].שיגעללאַ איז איינער פון די הויפּט באַקטיריאַ וואָס קאָזינג שילשל ווערלדווייד.די באַקטיריאַ קענען ינדוסירן IL-1β פּראָדוקציע דורך P2X7 רעסעפּטאָר-מעדיאַטעד ק + עפפלוקס, ריאַקטיוו זויערשטאָף מינים, ליסאָסאָמאַל אַסידאַפאַקיישאַן און מיטאָטשאָנדריאַל שעדיקן.די NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע רעגיאַלייץ נעגאַטיוולי פאַגאָסיטאָסיס און באַקטעריסידאַל טעטיקייט פון מאַקראָפאַגעס קעגן שיגעללאַ [55].פּלאַסמאָדיום שטודיום האָבן געוויזן אַז AIM2, NLRP3 אָדער קאַספּאַסע-1 דיפישאַנט מיסע ינפעקטאַד מיט פּלאַסמאָדיום פּראָדוצירן הויך לעוועלס פון טיפּ 1 ינטערפעראָן און זענען מער קעגנשטעליק צו פּלאַסמאָדיום ינפעקציע [56].אָבער, די ראָלע פון ​​אַלף-2 גיאַרדינע און אַלף-7.3 גיאַרדינע אין ינדוסינג פּאַטאַדזשעניק אַקטאַוויישאַן פון NLRP3 אָנצינדונג אין מיסע איז ומקלאָר.
אין דעם לערנען, ינאַבישאַן פון די NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע דורך MCC950 רידוסט BW און געוואקסן די נומער פון טראָפאָזאָיטעס אין ינטעסטאַנאַל לאַוואַגע פליסיק אין מיסע, ריזאַלטינג אין מער שטרענג פּאַטאַלאַדזשיקאַל ענדערונגען אין דואַדאַנאַל געוועב.אַלף-2 גיאַרדינע און אַלף-7.3 גיאַרדינע אַקטאַווייט די נלרפּ3 ינפלאַמאַסאָמע פון ​​די באַלעבאָס מויז, פאַרגרעסערן די גוף וואָג פון די מויז, רעדוצירן די נומער פון טראָפאָזאָיטעס אין ינטעסטאַנאַל לאַוואַגע פליסיק און גרינגער מאַכן פּאַטאַלאַדזשיקאַל דואַדינאַל ליזשאַנז.די רעזולטאטן פֿאָרשלאָגן אַז G. duodenalis קענען אַקטאַווייט די NLRP3 באַלעבאָס ינפלאַממאַסאָמע דורך אַלף-2 גיאַרדינע און אַלף-7,3 גיאַרדינע, רידוסינג די פּאַטאַדזשעניקאַטי פון G. duodenalis אין מיסע.
קאַלעקטיוולי, אונדזער רעזולטאַטן באַווייַזן אַז אַלף-2 און אַלף-7.3 גיאַרדינעס ינדוסירן די אַקטאַוויישאַן פון די NLRP3 באַלעבאָס ינפלאַממאַסאָמע און רעדוצירן די ינפעקטיוויטי פון G. duodenalis אין מיסע.דעריבער, די מאַלאַקיולז זענען פּראַמאַסינג טאַרגאַץ פֿאַר דער פאַרהיטונג פון גיאַרדיאַסיס.
       Data supporting the results of this study can be obtained from the respective author at gongpt@jlu.edu.cn.
Liang AKS, Liang AAM, Huang AHC, Sergi KM, Kam JKM.גיאַרדיאַסיס: אַן איבערבליק.עס איז לעצטנס גילוי אַז Pat Inflamm איז אַלערדזשיק צו דרוגס.2019;13:134–43.
Escobedo AA, Tsimerman S. Giardiasis: אַ רעצענזיע פון ​​פאַרמאַקאָטהעראַפּי.עקספּערט מיינונג פון אַ אַפּטייקער.2007;8: 1885-902.
טיאַן הואַפענג, טשען בין, ווען דזשיאַנפענג.גיאַרדיאַסיס, מעדיצין קעגנשטעל און די ופדעקונג פון נייַע טאַרגאַץ.ינפעקטאַד דיסאָרדער מעדיצין טאַרגאַץ.2010; 10:295-302.
וואַנג ז, זשאַנג רענטגענ, קסיאַאָ יי, זשאַנג וו, ווו רענטגענ, קין ה, אאז"ו ו. נלרפּ3 ינפלאַמאַטאָרי און ינפלאַמאַטאָרי חולאתן.אַקסייד מעד צעל לאָנגעוו.2020;2020:4063562.
Chen GY, Núñez G. די ראָלע פון ​​די ינפלאַמאַסאָמע אין ינטעסטאַנאַל אָנצינדונג און ראַק.גאַסטראָענטעראָלאָגי.2011;141:1986-99.
Pellegrini C, Antonioli L, Lopez-Castejon G, Blandizzi C, Fornai M. קאַנאָניקאַל און ייטיפּיקאַל NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע אַקטאַוויישאַן בייַ די שיידוועג פון ימיון טאָלעראַנץ און קישקע אָנצינדונג.פאַר-ימיון.2017;8:36.
לי ל, וואַנג קסק, גאָנג פּט, זשאַנג ען, זשאַנג רענטגענ, לי ז, עט על.ROS-מעדיאַטעד NLRP3 ינפלאַממאַסאָמע אַקטאַוויישאַן איז ינוואַלווד אין ענטפער צו N. caninum ינפעקציע.פּעראַסייט וועקטאָר.2020;13:449.